常見穩(wěn)定性同位素內(nèi)標(biāo)D和13C(及其檢測)
穩(wěn)定性同位素內(nèi)標(biāo)是質(zhì)譜方法(穩(wěn)定性同位素稀釋法)獨(dú)有的,沒有別的臨床檢測方法用到同位素內(nèi)標(biāo)。比如光吸收和免疫的方法,都無法分辨出被檢測物和同位素內(nèi)標(biāo)的區(qū)別,因?yàn)樗鼈兊睦砘再|(zhì)太接近了。如果真的加進(jìn)內(nèi)標(biāo),那測出來的值肯定大大的偏高。只有質(zhì)譜才能把同位素內(nèi)標(biāo)和要檢測的物質(zhì)分得開,雖然它們的差別只有幾個(gè)道爾頓,F(xiàn)在的內(nèi)標(biāo)基本都是穩(wěn)定同位素標(biāo)記的,常見的是D和13C。同位素內(nèi)標(biāo)和被檢測物是同一個(gè)物質(zhì),但是其中的幾個(gè)氫原子被氘所取代,或者是12C換成了13C,理化性質(zhì)基本不變。
同樣是標(biāo)記,13C就比D要好。但是D要比13C便宜很多。絕大多數(shù)D做的內(nèi)標(biāo)性能是很好的。出問題的經(jīng)常是一些疏水性比較差,保留時(shí)間比較短的物質(zhì)。出峰的時(shí)候跟很多其它物質(zhì)一起出來,些許的偏差就能引起濃度測不準(zhǔn)。
臨床檢測的數(shù)據(jù)要想測的準(zhǔn),離不開一條好的標(biāo)準(zhǔn)曲線。通俗來講,標(biāo)準(zhǔn)曲線就像一把尺子。只有把尺子做準(zhǔn)確了,才能把未知物品的長度測準(zhǔn)確。從科學(xué)上來講,標(biāo)準(zhǔn)曲線就是檢測物質(zhì)的濃度和儀器讀數(shù)的一種線形關(guān)系。一般是濃度越高,讀數(shù)越大。標(biāo)準(zhǔn)品的濃度是已知的,高中低都有。測完標(biāo)準(zhǔn)品以后,把它們的濃度和儀器測得的讀數(shù)在x/y的坐標(biāo)紙上一畫,連一條線就成了。測未知的病人樣品時(shí),濃度(x)是未知的,只有儀器的讀數(shù)(y),通過這條曲線可以把y換算成濃度。
標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)該怎么做,怎么用,這里面有很多學(xué)問。質(zhì)譜是新鮮技術(shù),大多的檢測項(xiàng)目還買不到標(biāo)準(zhǔn)品,只能自己配。做標(biāo)準(zhǔn)品需要有純樣品。**的純樣品應(yīng)該是濃度和純度都有保證書的,這樣用起來放心。如果是液體的溶液就更好了,省去自己稱量和溶解的麻煩。高濃度的純樣品要稀釋到不同的低濃度才能使用。用什么來稀釋是下一個(gè)非常關(guān)鍵的步驟,這里面牽扯到基質(zhì)效應(yīng)。因?yàn)榛|(zhì)效應(yīng)這塊兒瓦是質(zhì)譜臨床應(yīng)用里比較難理解的一個(gè)概念。
目前同位素內(nèi)標(biāo)廣泛應(yīng)用于臨床檢測中:
全譜氨基酸檢測