外泌體對細(xì)胞和動(dòng)物模型的影響

室實(shí)驗(yàn)僅能證明上下兩室的兩種細(xì)胞之間確實(shí)發(fā)生了物質(zhì)運(yùn)輸傳遞，接下來，通過外泌體跟蹤測試這些ATM分泌的外泌體是否可以被脂肪細(xì)胞吸收。從ATM細(xì)胞提取外泌體，加上PKH26標(biāo)簽，添加到3T3-L1脂肪細(xì)胞培養(yǎng)基中，12h后，在細(xì)胞里面觀察得到紅色的帶PKH26標(biāo)簽的外泌體。

外泌體對細(xì)胞和動(dòng)物模型的影響

已經(jīng)證實(shí)ATM細(xì)胞分泌的外泌體能夠轉(zhuǎn)運(yùn)miRNA到3T3-L1脂肪細(xì)胞，接下來可以把外泌體添加到細(xì)胞培養(yǎng)基或靜脈注射到動(dòng)物模型，觀察表型。從肥胖小鼠ATM中提取外泌體，靜脈注射到正常小鼠中，2周后，發(fā)現(xiàn)小鼠的葡萄糖耐受能力、胰島素敏感性、葡萄糖輸注率(GIR)、胰島素刺激的葡萄糖代謝速率(IS-GDR)、肝臟糖產(chǎn)出量(HGP)和循環(huán)系統(tǒng)中的游離脂肪酸(FFA)都下降了，而瘦的小鼠來源的ATM-exo沒有產(chǎn)生影響。表明肥胖動(dòng)物的ATM細(xì)胞產(chǎn)生含miRNA的外泌體，在體內(nèi)減弱胰島素敏感性（圖1）。將上述外泌體添加到多種細(xì)胞株的培養(yǎng)基中，24h后可觀察得細(xì)胞胰島素敏感性下降，與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致（圖2）。

圖一

圖二

外泌體miRNA測序

    已知是外泌體中的miRNA發(fā)揮了**的作用，可到底是哪些miRNA呢，可以通過高通量測序?qū)ふ移渲衅鹬�關(guān)鍵作用的分子。測序樣本：瘦的ATM-exo VS 肥胖ATM-exo。測序獲得的差異表達(dá)miRNA中，miR-155曾被報(bào)道通過**PPARγ，影響脂肪細(xì)胞分化，miR-155繼續(xù)研究

圖三

miRNA的功能

3T3-L1脂肪細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-155 mimic后，細(xì)胞葡萄糖吸收量減少（圖4）；敲除miR-155后細(xì)胞胰島素刺激的葡萄量吸收量上升；但移植骨髓后，miR-155重新表達(dá)，使細(xì)胞的葡萄糖吸收再次減少（圖5）。

圖四

圖五

（1）脂肪組織巨噬細(xì)胞分泌的外泌體miRNA可調(diào)節(jié)體內(nèi)和體外胰島素敏感性；

（2）脂肪組織巨噬細(xì)胞分泌的外泌體向胰島素靶細(xì)胞傳遞miRNA；

（3）肥胖ATM外泌體**瘦小鼠引起胰島素抵抗；

（4）瘦素ATM外泌體**肥胖小鼠改善胰島素抵抗；

（5）肥胖ATM外泌體含有miR155，可引起胰島素抵抗。

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