生物分離介質(zhì)在分離純化中可除脂多糖

一、內(nèi)毒素概念

內(nèi)毒素，是革蘭氏陰性細菌細胞壁中的一種成分，叫做脂多糖。脂多糖對宿主是有毒性的。內(nèi)毒素只有當細菌死亡溶解或用人工方法破壞菌細胞后才釋放出來，所以叫做內(nèi)毒素。其毒性成分主要為類脂質(zhì)A。內(nèi)毒素位于細胞壁的較外層、覆蓋于細胞壁的黏肽上。各種細菌的內(nèi)毒素的毒性作用較弱，大致相同，可引起發(fā)熱、微循環(huán)障礙、內(nèi)毒素休克及播散性血管內(nèi)凝血等。內(nèi)毒素可以用鱟試劑檢測。

二、內(nèi)毒素的去除

被污染的產(chǎn)品去除內(nèi)毒素即使在生產(chǎn)中采取了**的工藝和嚴格的預(yù)防措施,原液仍有可能被污染,如何處理已被污染的原液是比較棘手的問題。因為原液中通常已加入保護劑,重新純化是非常困難的。如果原液及保護劑的分子量與內(nèi)毒素分子量差別較大,那么選用適當?shù)牡某瑸V膜,通過超濾來去除內(nèi)毒素是可能的,但由于膜吸附過程中產(chǎn)熱及系統(tǒng)殘留等原因,活性損失較大。

生物制品在生產(chǎn)過程中去除內(nèi)毒素也是純化環(huán)節(jié)中重要一環(huán)節(jié)。生物制品的純化,主要是采用各種柱層析技術(shù),如疏水層析、離子交換、親和層析、分子篩等,這些技術(shù)純化目標產(chǎn)品的同時也可以**去除內(nèi)毒素。

三、各類層析介質(zhì)去除內(nèi)毒素原理和情況

1.分子篩：分子篩是利用凝膠的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)根據(jù)分子大小進行分離的一種方法。一般重組產(chǎn)品分子量為幾萬道爾頓,而內(nèi)毒素分子量為幾十萬至上百萬道爾頓,常是多聚體,因此利用分子篩可以**去除內(nèi)毒素,但其處理量小,處理時間較長。

2.疏水層析：內(nèi)毒素的脂肪A部份有很強的疏水性,但在高鹽下會凝集,無法掛上疏水層析柱�？蛇x擇能結(jié)合目標蛋白的疏水介質(zhì)而去除內(nèi)毒素。

3.離子交換：離子交換法是通過帶電的溶質(zhì)分子與離子交換劑中可交換的離子進行交換而達到分離純化的方法。內(nèi)毒素在pH>2時帶負電荷,與陰離子交換介質(zhì)Q Bio-sep FF或DEAE Bio-sep FF有較強結(jié)合,可在洗脫目標蛋白后用高鹽緩沖液或NaOH去除,這是離子交換法去除內(nèi)毒素的基礎(chǔ)。Pharmacia公司已開發(fā)利用離子交換層析法從白蛋白中去除內(nèi)毒素的工藝,主要采用DEAE Sepharose Fast Flow介質(zhì),將被內(nèi)毒素污染的白蛋白上柱,白蛋白和大部分內(nèi)毒素結(jié)合于介質(zhì)上,先清洗掉不結(jié)合的內(nèi)毒素,然后選擇性洗脫白蛋白。

.親合層析：親合層析技術(shù),特別是免疫吸附劑在生產(chǎn)中的運用使得生物大分子的純化變得簡單。免疫吸附的原理基于抗原、抗體的特異性作用,以目標蛋白作為抗原,將通過雜交瘤技術(shù)生產(chǎn)的單克隆抗體偶聯(lián)于介質(zhì)上,以此介質(zhì)來吸附目標蛋白。由于相互作用的高度特異性,理論上僅有目標蛋白吸附于介質(zhì)上,內(nèi)毒素全部穿透,洗脫后將得到純度很高的無熱原產(chǎn)品。實際上,由于介質(zhì)本身存在的非特異性吸附,仍有少量的雜蛋白和內(nèi)毒素同時被吸附,但內(nèi)毒素含量是**的。在干擾素(IFN)生產(chǎn)中,洗脫物內(nèi)毒素含量一般為0.25EUmL-1。

目前較為**的處理方法是采用親和層析技術(shù)將毒素底物LAL或多粘菌素B(PMB)偶聯(lián)于CNBr activated Bio-sep FF或NHS-activated Bio-sep FF上,以此介質(zhì)特異性吸附內(nèi)毒素,而讓蛋白通過。

產(chǎn)品供應(yīng)：

弱陰離子交換介質(zhì)(DEAE)    

弱陽離子交換介質(zhì)(CM)    

強陰離子交換介質(zhì)(Q)    

強陽離子交換介質(zhì)(SP)    

瓊脂糖親和介質(zhì)(肝素)    

瓊脂糖親和介質(zhì)(谷胱甘肽)    

瓊脂糖親和介質(zhì)(Ni)    

瓊脂糖親和介質(zhì)(藍膠)    

瓊脂糖親和介質(zhì)(Protein A)    

疏水層析介質(zhì)(苯基瓊脂糖)    

疏水層析介質(zhì)(丁基瓊脂糖)    

疏水層析介質(zhì)(丁基硫瓊脂糖)    

環(huán)氧活化瓊脂糖凝膠介質(zhì)    

PST介質(zhì)(30微米, 疏水)    

PHEMA介質(zhì)(30微米, 親水)    

鎳離子瓊脂糖凝膠4FF/6FF    

鎳離子瓊脂糖凝膠4FF/6FF    

鎳離子瓊脂糖凝膠4FF/6FF    

耐堿Protein A 瓊脂糖凝膠4FF    

耐堿Protein A 瓊脂糖凝膠4FF    

耐堿Protein A 瓊脂糖凝膠4FF    

耐堿Protein A 瓊脂糖凝膠4FF    

Protein A 瓊脂糖凝膠4FF    

Protein A 瓊脂糖凝膠4FF    

Protein A 瓊脂糖凝膠4FF    

Protein A 瓊脂糖凝膠4B    

Protein A 瓊脂糖凝膠4B    

Protein A 瓊脂糖凝膠4B    

Protein G 瓊脂糖凝膠4FF    

Protein G 瓊脂糖凝膠4FF    

Protein G 瓊脂糖凝膠4FF    

Protein G 瓊脂糖凝膠4B    

Protein G 瓊脂糖凝膠4B    

Protein G 瓊脂糖凝膠4B    

DEAE高流速瓊脂糖微球（DEAE Bio-sep FF）    

Q高流速瓊脂糖微球（Q Bio-sep FF ）    

CM高流速瓊脂糖微球（CM Bio-sep FF）    

SP高流速瓊脂糖微球（SP Bio-sep FF）    

4B瓊脂糖微球（Bio-sep 4B）    

6B瓊脂糖微球（Bio-sep 6B）    

交聯(lián)4B瓊脂糖微球（Bio-sep CL4B）    

交聯(lián)6B瓊脂糖微球（Bio-sep CL6B）    

高流速4FF瓊脂糖微球（Bio-sep 4FF）    

高流速6FF瓊脂糖微球（Bio-sep 6FF）    

高濃度瓊脂糖微球    

苯基高流速瓊脂糖微球（Phenyl Bio-sep FF）    

丁基4B瓊脂糖微球（Butyl Bio-sep 4B）    

高流速丁基瓊脂糖微球（Butyl Bio-Sep 4FF）    

螯合高流速瓊脂糖微球（Chelating Bio-sep FF）(IDA)    

螯合高流速瓊脂糖微球（Chelating Bio-sep FF）(NTA)    

溴化氰高流速4FF瓊脂糖微球（CNBr Bio-sep 4FF）    

氨己基4B瓊脂糖微球（EAH Bio-sep 4B）    

羧戊基4B瓊脂糖微球（ECH Bio-sep 4B）    

環(huán)氧活化高流速瓊脂糖微球（Epoxy-activated Bio-sep FF）    

去內(nèi)毒素瓊脂糖微球6B/6FF（Endotoxin Removal Bio-sep 6B/6FF）    

肝素高流速瓊脂糖微球（Heparin Bio-sep 6FF）    

藍色高流速瓊脂糖微球（Blue Bio-sep 6FF）    

明膠瓊脂糖微球 4B/4FF（Gelatin Bio-sep 4B/4FF）    

賴氨酸瓊脂糖微球4B（Lysine Bio-sep 4B）    

硼酸高流速瓊脂糖微球    

Protein A 高流速4B瓊脂糖微球    

ConA 高流速4B瓊脂糖微球    

上述產(chǎn)品pg電子官方生物均可供應(yīng)，僅用于科研！

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