白介素10（IL-10）是一種功能強大的免疫調節(jié)劑，具有強大的和組織再生能力。在AKI中，研究表明IL-10可以通過限制炎癥細胞因子的產(chǎn)生和免疫細胞浸潤來預防缺血，順鉑或輸尿管梗阻引起的腎損傷，這表明IL-10可能成為AKI的新型療法。

我們發(fā)現(xiàn)胞外囊泡作為強大的納米載體進行**輸送在化學、基因等領域展現(xiàn)出巨大的應用前景。與現(xiàn)有的遞送系統(tǒng)相比，細胞外囊泡的獨特優(yōu)勢是其來源，這使其能夠逃避吞噬作用，延長**循環(huán)半衰期并降低免疫原性。因此，基于EV的**遞送系統(tǒng)可能是推動IL-10用于AKI的新型給藥策略。

因此，我們研究了一種從巨噬細胞衍生的負載IL-10的細胞外囊泡（IL-10+EV）的制備方法，并研究了IL-10+細胞外囊泡在缺血性AKI鼠模型中的效果。IL-10+EV能夠增強IL-10的穩(wěn)定性，并地靶向損傷的腎臟，這是由于其表面富含粘附成分包括整聯(lián)蛋白α₄β₁，α₅β₁，α_Lβ₂和α_Mβ₂。IL-10+EV的不僅可靶向腎小管間質中的巨噬細胞，而且可靶向腎中的腎小管上皮細胞（TECs），可****腎臟缺血/再灌注（I/R）損傷，并防止AKI向CKD的轉變。具體而言，文章顯示IL-10 + EV了哺乳動物雷帕霉素（mTOR）的靶標，因此促進了線粒體代謝以維持TEC中的線粒體穩(wěn)態(tài)。同時，IL-10 + EV還可誘導巨噬細胞向M2型轉化，促進腎臟。這個發(fā)現(xiàn)強烈支持將細胞外囊泡用作IL-10的多功能遞送系統(tǒng)，將其作為缺血性AKI的策略。

【圖文導讀】

圖1.IL-10+細胞外囊泡的制備和表征

A）用RFP標記的IL-10轉染RAW細胞，然后用地塞米松刺激

（B）在工程RAW細胞中對IL-10（綠色）和EV標記CD63（紅色）進行免疫染色

（C）在IL-10+細胞外囊泡中對EV相關的（Alix，CD63和CD81）和巨噬細胞相關的標志物（CD68和CD206）進行蛋白質印跡分析

（D）IL-10+細胞外囊泡的尺寸分布和代表性TEM圖像

（E）顯示從抗體陣列分析獲得的每種細胞因子的蛋白質水平

（F）細胞外囊泡中IL-10的ELISA分析，以及IL-10+細胞外囊泡中的IL-10和IL-10受體的蛋白質印跡分析（n = 3或6）

（G）通過實時定量PCR測量IL-10+細胞外囊泡中的IL-10 mRNA

（H-1）比較IL-10 +細胞外囊泡和游離IL-10在不同條件下的穩(wěn)定性，包括在37°C或-80°C下放置一周，在pH 5.5溶液中12小時

圖2.腎靶向IL-10+EV

（A）以親代RAW細胞為對照的IL-10+EVs蛋白質組成的LC-MS/MS分析

（B）蛋白質印跡分析

（C-E）為了分析體內分布，給小鼠靜脈注射DID標記的IL-10+EV（n=3）

（C）注射后6、12、24、48和96小時（缺血時間35分鐘）對指定器官的熒光強度成像

（D）缺血20分鐘，28分鐘和35分鐘的IRI腎臟在12小時時的熒光強度成像

（E）代表性共聚焦圖像顯示DID標記的IL-10+EV在小管（包括近端小管和遠端小管），內皮細胞（CD31）和巨噬細胞（CD68）中的蓄積

（F-G）H/R誘導的TECs攝取PKH67標記的IL-10+EV（n = 3）

圖3.IL-10+EV可預防小鼠的腎臟I/R損傷

（A）實驗設計示意圖

（B）IL-10+EV對血清肌酐的影響（n = 10）

（C）基于H＆E染色的腎小管損傷的量化（n = 10）

（D）腎皮質和髓質的H＆E染色的代表性圖像

（E-G）TUNEL染色和凋亡細胞定量的代表性圖像（n = 6）

（F-H）代表性共聚焦圖像和KIM-1+小管的定量（n = 6）

（I）腎臟組織中caspase-3的蛋白質印跡分析（n = 3）

（J）實時定量PCR分析腎臟組織中炎性細胞因子mRNA水平（n = 6）

圖4.IL-10+EVs引起腎巨噬細胞表型轉變

（AB）分別用LPS，IL-4+IL-13或不同劑量的IL-10+EV刺激BMDM 48小時（ n = 3）

（C-E）IRI組與IL-10+EV組之間腎巨噬細胞表型變化的探討

圖6.IL-10+EVAKI-CKD轉變

（A）PAS染色的代表性圖像（n = 6）

（B）矢狀面Masson三色染色的代表性圖像（n = 6）

（C）腎組織中膠原蛋白I和α-平滑肌肌動蛋白（β-SMA）的蛋白質印跡分析（n = 4）

（D）腎臟切片中CD68+巨噬細胞和CD3+T細胞的代表性共聚焦圖像（n = 6）

（E）用于缺血性AKI的IL-10+EV制劑的示意圖