免疫比濁法和ps聚苯乙烯納米微球的制備方法

免疫比濁法（Turbidimetric inhibition immuno assay）是抗原抗體結(jié)合動(dòng)態(tài)測(cè)定方法。其基本原理是：當(dāng)抗原與抗體在特殊稀釋系統(tǒng)中反應(yīng)而且比例合適(一般規(guī)定抗體過量)時(shí)，形成的可溶性免疫復(fù)合物在稀釋系統(tǒng)中的促聚劑（聚乙二醇等）的作用下，自液相析出，形成微粒，使反應(yīng)液出現(xiàn)濁度。當(dāng)抗體濃度固定時(shí)，形成的免疫復(fù)合物的量隨著檢樣中抗原量的增加而增加，反應(yīng)液的濁度也隨之增加。通過測(cè)定反應(yīng)液的濁度與一系列標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，即可計(jì)算出檢樣中抗原的含量。

分類

1.免疫透射比濁法 ：抗原抗體結(jié)合后，形成免疫復(fù)合物，在一定時(shí)間內(nèi)復(fù)合物聚合出現(xiàn)濁度。當(dāng)光線通過溶液時(shí)，可被免疫復(fù)合物吸收。免疫復(fù)合物量越多，光線吸收越多。光線被吸收的量在一定范圍內(nèi)與免疫復(fù)合物的量成正比。利用比濁計(jì)測(cè)定光密度值，復(fù)合物的含量與光密度值成正比，同樣當(dāng)抗體量一定時(shí)，光密度值也與抗原含量成正比。本法較單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)和火箭電泳等一般免疫化學(xué)定量方法敏感、快速簡(jiǎn)便，但要求免疫復(fù)合物的數(shù)量和分子量達(dá)到一定高度，否則就難以測(cè)出。

2.免疫散射比濁法 ：一定波長(zhǎng)的光沿水平軸照射，通過溶液使遇到抗原抗體復(fù)合物粒子，光線被粒子顆粒折射，發(fā)生偏轉(zhuǎn)，光線偏轉(zhuǎn)的角度與發(fā)射光的波長(zhǎng)和抗原抗體復(fù)合物顆粒大小和多少密切相關(guān)。散射光的強(qiáng)度與復(fù)合物的含量成正比，即待測(cè)抗原越多，形成的復(fù)合物也越多，散射光也越強(qiáng)。散射光的強(qiáng)度還與各種物理因素，如加入抗原或抗體的時(shí)間、光源的強(qiáng)弱和波長(zhǎng)、測(cè)量角度等密切相關(guān)。散射比濁法又分為速率散射比濁法和終點(diǎn)散射比濁法。

3.免疫膠乳比濁法 ：膠乳比濁法即是將待測(cè)物質(zhì)相對(duì)應(yīng)的抗體包被在直徑為15－60nm的膠乳顆粒上，使抗原抗體結(jié)合物的體積增大，光通過之后，透射光和散射光的強(qiáng)度變化更為**，從而提高試驗(yàn)的敏感性。

直徑為15－60nm的膠乳顆粒常見：聚苯乙烯。

注意事項(xiàng)

抗體（Ab）與可溶性抗原（Ag）反應(yīng)，形成一定結(jié)構(gòu)的免疫復(fù)合物，成為懸浮于反應(yīng)溶液中的微粒。在沉淀反應(yīng)中形成的復(fù)合物微粒具有特殊的光學(xué)性質(zhì)，可用儀器檢測(cè)，提高了檢測(cè)的速度、靈敏度和易操作性。

免疫比濁測(cè)定注意事項(xiàng)：

1、抗原或抗體量大大過剩，可出現(xiàn)可溶性復(fù)合物，造成誤差。

2、應(yīng)維持反應(yīng)管中抗體蛋白始終過剩。

3、易受到脂血的影響。

發(fā)展歷程

早期免疫分析通過觀察沉淀物形成，凝集及溶血現(xiàn)象發(fā)生來(lái)分析，如免疫擴(kuò)散、免疫電泳、血凝試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合等。

上世紀(jì)50年代末60年代初，利用AG-AB復(fù)合物形成使?jié)岫雀淖儯�再用比濁�?jì)來(lái)比濁，但因其敏感性差未被接受。

70年代初，開始有自動(dòng)檢測(cè)系統(tǒng)，但因其用的是激光為光源，固定波長(zhǎng)，靈敏度較低，而且時(shí)間一般要2—3小時(shí)，很難滿足臨床需要。

70年代末，速率比濁計(jì)的出現(xiàn)，使抗原抗體結(jié)合的反應(yīng)在幾十秒內(nèi)出結(jié)果，可以說(shuō)是免疫化學(xué)測(cè)定的革命性的發(fā)展。

隨著標(biāo)記技術(shù)的發(fā)展，免疫化學(xué)納入臨床化學(xué)檢驗(yàn)范疇。

脫硫劑在脫硫過程中所發(fā)生的反應(yīng)是氣固反應(yīng)，在反應(yīng)過程中都涉及到復(fù)雜的氣固傳質(zhì)過程，聚苯乙烯微球可作為脫硫劑制備中的造孔劑，但是目前的技術(shù)問題是很難制作出連續(xù)均勻的聚苯乙烯納米微球。

聚苯乙烯納米微球的制備方法

將十二烷基硫酸鈉和一定量去離子水在室溫下加入四頸燒瓶中，攪拌混合液至澄清后，加入NaOH/NaHCO3的緩沖溶液和苯乙烯，攪拌2h后快速升溫至80℃，在此過程中勻速滴加過硫酸鉀溶液，控制滴加時(shí)間30min，滴加完畢后恒溫反應(yīng)8h即可得到白色漿狀物的聚苯乙烯微球乳液。

所使用的化學(xué)材料為：

苯乙烯（液態(tài)、級(jí)別：分析純）、過硫酸鉀（固態(tài)、級(jí)別：分析純）、氫氧化鈉（固態(tài)、級(jí)別：分析純）、十二烷基硫酸鈉（固態(tài)、級(jí)別：分析純）、碳酸氫鈉（固態(tài)、級(jí)別：分析純）。

方法一：

1，取氫氧化鈉和碳酸氫納各0.1g+0.001g配成復(fù)合緩沖溶液。

2，取過硫酸鉀0.45g±0.001g去離子水20ml±0.1ml，加入燒杯中，攪拌均勻，配成0.1mol/L 的過硫酸鉀水溶液。

3，取十二烷基硫酸鈉 1g±0.001g，去離子水500ml+0.1ml在室溫下加入一個(gè)1000mL的四頸燒瓶中，攪拌混合液至澄清后，取氫氧化鈉和碳酸氫納緩沖溶液10ml和苯乙烯3ml，攪拌2h后快速升溫至80℃，在此過程中勻速滴加過硫酸鉀溶液10ml +0.1ml，控制滴加時(shí)間30min，滴加完畢后恒溫反應(yīng)8h，停止攪拌與加熱，待自然冷卻至常溫即可得到白色漿狀物的聚苯乙烯微球乳液，乳液中的微徑平均為50nm。

方法二：

1，取氫氧化鈉和碳酸氫納各0.1g+0.001g配成復(fù)合緩沖溶液。

2，取過硫酸鉀0.45g±0.001g去離子水20ml±0.1ml，加入燒杯中，攪拌均勻，配成0.1mol/L 的過硫酸鉀水溶液。

3，取十二烷基硫酸鈉1 g±0.001g，去離子水500ml+0.1ml在室溫下加入一個(gè)1000mL的四頸燒瓶中，攪拌混合液至澄清后，取氫氧化鈉和碳酸氫納緩沖溶液10ml和苯乙烯5ml，攪拌2h后快速升溫至80℃，在此過程中勻速滴加過硫酸鉀溶液10 ml +0.1ml，控制滴加時(shí)間30min，滴加完畢后恒溫反應(yīng)8h，停止攪拌與加熱，待自然冷卻至常溫即可得到白色漿狀物的聚苯乙烯微球乳液，乳液中的微徑平均為60nm。

wyf 04.12