DSPE-PEG2000-SH 修飾脂質(zhì)體的制備步驟?

1. 材料準備?

核心組分?：

主磷脂?：HSPC、DSPC 或 DMPC（調(diào)節(jié)膜流動性）；

膽固醇?：優(yōu)化膜穩(wěn)定性和包封效率（一般占總脂質(zhì)的 20–30 mol%）；

DSPE-PEG2000-SH?：提供 PEG 親水層和巰基修飾位點（占總脂質(zhì)的 3–5 mol%）；

溶劑與儀器?：

有機溶劑：氯仿/甲醇（體積比 2:1）溶解脂質(zhì)；

水相：PBS 緩沖液或去離子水；

設(shè)備：旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、超聲儀、擠出裝置（聚碳酸酯膜）。

2. 脂質(zhì)混合與成膜?

配方設(shè)計?：

典型摩爾比：HSPC:膽固醇 = ?65:30:5?；

根據(jù)負載藥物性質(zhì)（如疏水性或親水性）調(diào)整比例。

溶解與混合?：

將所有脂質(zhì)溶于氯仿/甲醇混合溶劑，室溫超聲 10 分鐘至完全溶解；

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成膜?：

將混合液轉(zhuǎn)移至圓底燒瓶，40°C 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，形成均勻脂質(zhì)薄膜；

真空干燥 1–2 小時徹底去除殘留溶劑。

3. 水化與粒徑控制?

水化?：

加入預(yù)熱的 PBS 緩沖液（或含藥物的水相），40°C 振蕩 30 分鐘使脂質(zhì)膜充分水化；

初步形成多室脂質(zhì)體（MLVs）。

超聲或擠出均質(zhì)化?：

超聲法?：探頭超聲處理（間歇模式，避免過熱）至懸液半透明；

擠出法?（更優(yōu)）：依次通過 400 nm、200 nm、100 nm 聚碳酸酯膜，循環(huán)擠出 5–10 次，獲得單室小脂質(zhì)體（SUVs）。

4. 純化與后處理?

去除未包封物質(zhì)?：

超濾法?：使用截留分子量 100 kDa 的超濾管離心去除游離藥物或雜質(zhì)；

透析法?：在 PBS 緩沖液中透析 12–24 小時；

滅菌與保存?：

過 0.22 μm 濾膜滅菌，4°C 短期保存或凍干長期儲存。

5. 質(zhì)量評價?

粒徑與分散性?：動態(tài)光散射（DLS）檢測平均粒徑（通常 80–150 nm）和 PDI（<0.2 為佳）；

包封率?：超濾-高效液相色譜（HPLC）法測定藥物包封率；

穩(wěn)定性?：4°C 或 37°C 下監(jiān)測粒徑變化，評估儲存穩(wěn)定性。

關(guān)鍵注意事項?

巰基保護?：制備過程中加入 1–5 mM EDTA 或 DTT，防止巰基氧化；

批次一致性?：嚴格控制脂質(zhì)比例、擠出壓力和溫度，確保粒徑均一性；

靶向修飾?（可選）：通過 DSPE-PEG2000-SH 的巰基偶聯(lián)靶向配體（如抗體或肽段），需在脂質(zhì)體純化后進行。

制備流程總結(jié)

配方設(shè)計 → 脂質(zhì)溶解 → 薄膜形成 → 水化 → 粒徑控制 → 純化 → 質(zhì)量評價

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