FITC-D-Lys熒光探針的標(biāo)記原理是什么？

FITC-D-Lys 是由異硫氰酸熒光素（FITC）與 D-賴氨酸通過(guò)共價(jià)鍵結(jié)合形成的熒光探針，主要用于生物標(biāo)記和檢測(cè)領(lǐng)域。以下是綜合分析：

一、化學(xué)結(jié)構(gòu)與標(biāo)記原理

核心組成?

FITC?：具有異硫氰酸酯基團(tuán)（-NCS）的綠色熒光染料，激發(fā)波長(zhǎng)約 495nm，發(fā)射波長(zhǎng)約 520nm。

D-賴氨酸?：賴氨酸的 D-型立體異構(gòu)體，側(cè)鏈含氨基，具有獨(dú)特的生物正交性。

連接方式?：FITC 的異硫氰酸酯基團(tuán)與 D-賴氨酸側(cè)鏈氨基通過(guò)親核加成-消除反應(yīng)形成硫脲鍵（-NH-CS-NH-）。

物理化學(xué)性質(zhì)?

溶解性?：溶于水、DMSO 等極性溶劑，微溶于乙醇。

儲(chǔ)存條件?：需避光保存于 -20℃，防止降解。

純度標(biāo)準(zhǔn)?：純度 ≥95%，標(biāo)記率 ≥90%。

二、主要應(yīng)用場(chǎng)景

細(xì)胞成像與代謝研究?

通過(guò) LAT1 轉(zhuǎn)運(yùn)體進(jìn)入細(xì)胞，追蹤 D-賴氨酸的代謝路徑。

標(biāo)記活細(xì)菌細(xì)胞壁，用于革蘭氏陽(yáng)性/陰性菌的實(shí)時(shí)成像。

蛋白質(zhì)工程與標(biāo)記?

標(biāo)記重組蛋白的非天然氨基酸位點(diǎn)，研究蛋白質(zhì)折疊與功能。

用于熒光示蹤蛋白-蛋白相互作用。

生物傳感與檢測(cè)?

結(jié)合納米材料構(gòu)建熒光探針，檢測(cè) pH、金屬離子等。

流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞活性及代謝狀態(tài)。

三、制備與純化方法

反應(yīng)條件?

pH 范圍?：8.0-9.0（碳酸氫鈉緩沖液）。

摩爾比?：FITC 與 D-賴氨酸按 1:1 或 1:2 混合。

反應(yīng)時(shí)間?：室溫下避光反應(yīng) 1-2 小時(shí)。

純化技術(shù)?

凝膠過(guò)濾?：使用 Sephadex G-25 去除未反應(yīng) FITC。

HPLC?：反相 C18 色譜柱分離產(chǎn)物。

四、技術(shù)優(yōu)勢(shì)與局限性

優(yōu)勢(shì)?

D-構(gòu)型避免天然代謝干擾，提升標(biāo)記特異性。

熒光強(qiáng)度隨 pH 變化的特性適用于溶酶體成像。

挑戰(zhàn)?

需優(yōu)化細(xì)胞穿透效率及深部組織成像能力。

需評(píng)估探針的細(xì)胞毒性與生物相容性。

五、注意事項(xiàng)

實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)?：需設(shè)置對(duì)照組以排除熒光干擾。

儲(chǔ)存與使用?：DMSO 溶液避光儲(chǔ)存不超過(guò)一個(gè)月。