fitc熒光染料激發(fā)發(fā)射波長(zhǎng)是多少？Fitc的使用方法介紹！

FITC（Fluorescein Isothiocyanate，異硫氰酸熒光素）是一種經(jīng)典且廣泛使用的綠色熒光染料，在免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)中被用來(lái)標(biāo)記抗體、蛋白質(zhì)、多肽、寡核苷酸等，用于熒光顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)（FACS）、ELISA和各種生物成像。

基本信息

中文名稱：異硫氰酸熒光素

英文縮寫：FITC

激發(fā)波長(zhǎng)（Ex）：約 495 nm

發(fā)射波長(zhǎng)（Em）：約 519–525 nm

熒光顏色：綠色

分子量：約 389.4 Da（FITC-NH2）；依賴于修飾形式

溶解性：可溶于DMSO、DMF、少量有機(jī)溶劑；低水溶性

化學(xué)結(jié)構(gòu)與偶聯(lián)機(jī)制

功能基團(tuán)：異硫氰酸基（–N=C=S）

作用機(jī)制：可與生物分子的伯胺（–NH?）發(fā)生共價(jià)反應(yīng)，常用于抗體、蛋白質(zhì)或多肽的標(biāo)記。

應(yīng)用領(lǐng)域

抗體/蛋白標(biāo)記

FITC常用于免疫熒光實(shí)驗(yàn)（IF）或流式細(xì)胞術(shù)（FACS）中標(biāo)記一抗或二抗，方便追蹤目標(biāo)分子的表達(dá)與分布。

流式細(xì)胞術(shù)

標(biāo)記細(xì)胞表面或胞內(nèi)抗原，用于細(xì)胞分型、凋亡分析、活性評(píng)估等。

熒光顯微成像

可檢測(cè)細(xì)胞或組織中抗原的定位和表達(dá)，通過(guò)FITC標(biāo)記抗體實(shí)現(xiàn)綠色信號(hào)顯示。

多重染色

與其他熒光染料（如TRITC、DAPI、Cy5等）組合用于多通道成像實(shí)驗(yàn)。

DNA/RNA探針標(biāo)記

可與寡核苷酸連接，用于FISH、雜交探針和qPCR探針開發(fā)。

? 優(yōu)點(diǎn)

應(yīng)用廣泛，具有高度成熟的使用體系

成本低，易于獲取

與多數(shù)檢測(cè)系統(tǒng)兼容（如顯微鏡、流式、酶標(biāo)儀等）

缺點(diǎn)和注意事項(xiàng)

光穩(wěn)定性差：易被光照分解，長(zhǎng)時(shí)間曝光會(huì)發(fā)生熒光淬滅，需避光操作

pH敏感：熒光強(qiáng)度受pH影響較大（在 pH 6.5~8.0 范圍內(nèi)較穩(wěn)定）

易水解：異硫氰酸基團(tuán)對(duì)水敏感，應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用

熒光壽命短：信號(hào)持續(xù)性較差，不適合長(zhǎng)時(shí)程追蹤成像

常見FITC衍生物

與其他綠色熒光染料比較

抗體FITC標(biāo)記操作簡(jiǎn)要流程（NHS酯法）

溶解FITC-NHS于DMSO（避免水）

將蛋白質(zhì)溶于堿性緩沖液（如0.1 M NaHCO?，pH 8.5）

按比例加入FITC-NHS溶液（一般摩爾比為5~20:1）

避光孵育1小時(shí)

使用透析或凝膠過(guò)濾柱去除游離FITC

測(cè)定標(biāo)記效率（通過(guò)光密度比OD495/OD280）

總結(jié)

FITC 是一種經(jīng)典、高效且經(jīng)濟(jì)的熒光染料，適用于多種生物標(biāo)記實(shí)驗(yàn)。它的綠色熒光信號(hào)清晰、易于檢測(cè)，但在光照和pH條件下需控制，適合短期觀察實(shí)驗(yàn)和常規(guī)標(biāo)記。