PKH26熒光染料的化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)以及染色方法

1. 化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

PKH26是一種紅色熒光染料，化學(xué)式為C??H??IN?，分子量為961.34。它能夠穩(wěn)定地結(jié)合到細胞膜的脂質(zhì)區(qū)域，發(fā)出明亮的紅色熒光，其激發(fā)波長為551nm，發(fā)射波長為567nm。PKH26具有高脂溶性，能夠輕易穿透細胞膜，對細胞毒性較小，熒光背景低，且不會影響細胞的正常生理功能。

2. 應(yīng)用領(lǐng)域

- 細胞標記與示蹤：PKH26廣泛用于體外和體內(nèi)的細胞標記與示蹤研究。它能夠與細胞膜穩(wěn)定結(jié)合，形成持久的熒光標記，使得標記的細胞在生長周期內(nèi)都能保持熒光信號。例如，在細胞遷移和侵襲研究中，PKH26可用于標記腫瘤細胞，通過細胞劃痕實驗或Transwell實驗評估其遷移和侵襲能力。

- 細胞增殖研究：PKH26可用于檢測細胞增殖。在細胞分裂過程中，熒光強度會隨著細胞的分裂而逐級遞減，標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中。通過流式細胞儀，可以根據(jù)熒光強度的不同檢測出未分裂細胞、分裂一次、二次、三次及更多分裂次數(shù)的細胞。

- 外泌體標記：PKH26還可用于標記外泌體。外泌體是細胞分泌的微小囊泡，參與細胞間通訊和疾病發(fā)生發(fā)展。通過PKH26標記外泌體，可以研究其在細胞間的傳遞和功能。

- 其他應(yīng)用：PKH26還可用于研究細胞吞噬作用、細胞間膜的轉(zhuǎn)移、抗原呈遞、細胞粘附以及組織切片中的神經(jīng)元遷移。

3. 染色方法

- 儲備液制備：將1mg PKH26溶解在1mL DMSO中，得到1mM儲備液。儲備液建議在-20°C或-80°C避光保存，避免反復(fù)凍融。

- 工作液配制：用無血清細胞培養(yǎng)基或PBS按1:50或1:100稀釋儲備液，得到5-10μM的工作液。

- 細胞染色：對于懸浮細胞，將細胞密度調(diào)整為1×10?/mL，加入1mL工作液，室溫孵育10-45分鐘，然后用PBS洗滌。對于貼壁細胞，將細胞培養(yǎng)在蓋玻片上，加入100μL工作液，輕搖覆蓋細胞，室溫孵育5-30分鐘，再用培養(yǎng)基洗滌。

4. 優(yōu)點

- 高穩(wěn)定性：PKH26的熒光信號明亮且穩(wěn)定，即使在長時間觀察和實驗中也不會因熒光衰減而影響細胞追蹤效果。

- 不影響細胞功能：標記后的細胞仍然保持正常的生物學(xué)活性和功能，不會干擾細胞實驗的結(jié)果。

- 高靈敏度和特異性：PKH26能夠在很低的濃度下標記細胞，具有高靈敏度和特異性。

- 持久的熒光信號：PKH26染料能夠與細胞膜穩(wěn)定結(jié)合，標記細胞在生長周期內(nèi)都能保持熒光信號，無需再次染色。

5. 注意事項

- PKH26試劑為DMSO溶液，在低溫時會凝固，需要加熱融解后使用。

- 染色工作液需要現(xiàn)配現(xiàn)用，不能提前配制，以避免染料水解和變質(zhì)。

- 染色過程中需要控制適當?shù)姆跤龝r間和溫度，以確保染料與細胞膜的結(jié)合效果。

- 洗滌步驟應(yīng)優(yōu)化，以確保既去除多余染料又不破壞細胞的結(jié)構(gòu)和功能。

PKH26作為一種高效的細胞膜標記染料，因其高穩(wěn)定性、低毒性以及持久的熒光信號，在細胞生物學(xué)、醫(yī)學(xué)研究以及藥物遞送等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。

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