牛奶外泌體裝載miRNA204的制備：

電轉(zhuǎn)外泌體裝載 miRNA204： 400 nmol?L -1 miRNA204 與 640 μg 牛奶外泌體混

合于 400 μL 電轉(zhuǎn)緩沖液中， 樣品與電擊杯冰浴 10 min， 樣品中不能有氣泡。 電擊杯放

入電極間進(jìn)行放電， 電壓 350 V， 脈沖時(shí)間累計(jì) 10 ms。 電擊結(jié)束后樣品置于 37 o C 恒溫

箱中 20 min， 恢復(fù)牛奶外泌體膜結(jié)構(gòu)。 由于 miRNA 是線性分子， 選用 10 kDa 的微量超

濾管純化， 超濾管先用 DEPC 水于 7000 r?min -1 潤洗 10 min。 樣品于 7000 r?min -1 超濾純

化得到裝載 miRNA204 的牛奶外泌體（mExo-miRNA204） 樣品。 所有操作在避光、 低

溫以及無 RNA 酶環(huán)境下進(jìn)行。

牛奶外泌體裝載miRNA204的表征：

牛奶外泌體對 miRNA204 裝載能力的表征： 用多功能酶標(biāo)儀進(jìn)行熒光定量，激發(fā)波長 490 nm， 發(fā)射波長 520 nm， 繪制熒光強(qiáng)度與 miRNA204 濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖1）。 miRNA 包封率計(jì)算公式如下：

圖1

純化后樣品 mExo-miRNA204 與等量游離的 miRNA204 進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳， 78 V

電泳 25 min 后用凝膠成像儀拍攝熒光圖像。

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血漿內(nèi)皮細(xì)胞來源外泌體

樹突狀細(xì)胞來源的外泌體

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人內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPC)分泌外泌體

外泌體中微小RNA-126(miRNA-126)

纖維細(xì)胞分泌外泌體

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骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分離外泌體

小鼠肝**細(xì)胞(H22)源外泌體

人骨髓來源間充質(zhì)干細(xì)胞分泌外泌體

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大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞來源的外泌體

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胎盤來源外泌體miRNA

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血清外泌體來源microRNA-221-3p

肝星狀細(xì)胞(HSC)來源外泌體

小鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(mASCs)來源外泌體

外泌體來源microRNA

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