CY3-山梨糖,Cyanine3-Sorbose的反應(yīng)機理
Cy3-Sorbose是一種通過共價偶聯(lián)將熒光染料Cy3修飾在山梨糖分子上的功能探針,用于生物成像和分子識別。其關(guān)鍵的反應(yīng)機理基于Cy3-NHS酯與山梨糖的胺基之間的酰胺鍵形成。
由于山梨糖缺少自由氨基,合成Cy3-Sorbose的前提是先對山梨糖進(jìn)行還原胺化處理,引入伯胺基團(tuán)。這一步驟通常采用亞硼氫鈉(NaBH3CN)作為還原劑,將山梨糖的開鏈醛基與胺試劑反應(yīng)形成穩(wěn)定的胺衍生物,為后續(xù)偶聯(lián)提供活性位點。
在偶聯(lián)反應(yīng)中,Cy3染料預(yù)先制備成活性N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)酯形式(Cy3-NHS)。NHS酯是一種常用的活性酯,具有良好的親電性,能夠與含有自由氨基的分子發(fā)生高效的親核取代反應(yīng)。
具體機理為:
Cy3-NHS酯中的羧基通過形成酯鍵與NHS結(jié)合,激活羧酸功能團(tuán),增強其親電性;
還原胺化后的山梨糖胺基作為親核試劑,進(jìn)攻NHS酯上的羧基碳,形成四面體中間體;
中間體解離釋放NHS,形成穩(wěn)定的酰胺鍵,Cy3染料成功共價連接于山梨糖分子上;
反應(yīng)通常在碳酸氫鹽緩沖液(pH 8.0-9.0)條件下進(jìn)行,既保證胺基活性又減少NHS酯的水解。
該酰胺鍵穩(wěn)定性高,使Cy3-Sorbose在生物體系中具備良好的化學(xué)穩(wěn)定性和光穩(wěn)定性,適合長時間追蹤和成像。
反應(yīng)過程中需避免光照及高溫,以保護(hù)Cy3熒光性能。純化一般采用透析或色譜方法去除未反應(yīng)的Cy3-NHS和雜質(zhì),獲得高純度標(biāo)記物。
產(chǎn)品名稱:CY3-山梨糖,Cyanine3-Sorbose
純度:95%+
性狀:基于不同的分子量,呈白色 / 類白色固體,或液體。
溶劑:溶于二氯甲烷、DMSO、水等常規(guī)有機溶劑。
儲藏條件:-20°C干燥避光保存
包裝規(guī)格:50mg 100mg 250mg 500mg(按需提供)
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