文獻(xiàn)：Milk exosomes with enhanced mucus penetrability for oral delivery of siRNA?

文獻(xiàn)鏈接：https://pubs.rsc.org/en/content/articlehtml/2020/bm/d0bm01497d

熒光共軛DSPE-PEG疊氮化物的制備。

利用DSPE-PEG-疊氮化物（以下簡(jiǎn)稱DPA）在mExo表面上實(shí)現(xiàn)疏水插入PEG涂層。首先將DPA溶解在2 mg mL?1的DMSO中，然后在連續(xù)攪拌下滴加到1×PBS中，使DPA的最終濃度為0.02 mg mL?1（7μM），從而制備水性儲(chǔ)備溶液。對(duì)于涉及DPA濃度定量的研究（即mExo表面負(fù)載和錨定穩(wěn)定性研究的測(cè)量），DPA通過(guò)疊氮化物DBCO點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)與熒光部分DBCO-Cy5偶聯(lián)。在持續(xù)攪拌下，將DBCO-Cy5（1 mg mL-1的DMSO溶液）逐滴加入DPA水溶液中，最終摩爾比為1[稀空間（1/6-em）]:[稀空間。然后在室溫下輕輕搖晃該溶液6小時(shí)，以促進(jìn)點(diǎn)擊反應(yīng)。點(diǎn)擊反應(yīng)后，將含有DPA-Cy5和過(guò)量DBCO-Cy5的溶液直接加入外泌體樣品中進(jìn)行插入。

聚乙二醇化mExo的合成。DPA疏水性插入mExo膜是通過(guò)一種被動(dòng)的生物相容性過(guò)程促進(jìn)的，該過(guò)程涉及mExo和DPA分子的共孵育。首先，在室溫下連續(xù)攪拌下，將125μL mExo原液滴加到DPA水溶液中，最終反應(yīng)混合物體積為1.5 mL。然后將該混合物在37°C下輕輕搖晃1小時(shí)，形成PEG-mExo。隨后，通過(guò)在100kDa MWCO離心過(guò)濾器上離心（UFC）進(jìn)行超濾，將未插入的DPA分子從PEG-mExo中分離出來(lái)。當(dāng)使用UFC純化PEG-mExo時(shí)，我們使用2次連續(xù)的旋轉(zhuǎn)，每次旋轉(zhuǎn)10分鐘，每次旋轉(zhuǎn)4000g，在此期間，用PBS將濃縮的PEG-mExo樣品稀釋至1.5mL進(jìn)行洗滌。

在量化表面負(fù)載效率時(shí)，使用DPA-Cy5代替DPA，使用相同的負(fù)載過(guò)程。為了量化DPA表面負(fù)載，我們使用DPA與mExo顆粒的不同摩爾比進(jìn)行了上述過(guò)程——5000[薄空間（1/6-em）]：[薄空間。使用平板讀數(shù)器在每個(gè)最終的PEG-mExo樣品中測(cè)量Cy5熒光，并將其與DBCO-Cy5的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較，以量化插入mExo表面的DPA濃度。

假設(shè)UCF過(guò)濾器中保留的所有Cy5信號(hào)都來(lái)自插入mExo膜的DPA。然而，為了考慮來(lái)自保留在過(guò)濾器中的DPA-Cy5膠束的可能背景信號(hào)以及與mExo表面相關(guān)的過(guò)量DBCO-Cy5，制備了不含DPA（僅DBCO-Cy 5和mExo）和不含mExo（僅DPA-Cy 5）的對(duì)照混合物，然后如上所述純化和定量保留的Cy5信號(hào)。從具有分級(jí)DPA[薄空間（1/6-em）]:[薄空間的（1/6-em）]mExo摩爾比的樣品的測(cè)量值中減去來(lái)自這兩個(gè)對(duì)照樣品的Cy5信號(hào)。

相關(guān)推薦產(chǎn)品：

RB-PEG-DSPE，DSPE-PEG-RB

ICG-PEG-DLPE

ICG-PEG-DMPE

ICG-PEG-DOPE

ICG-PEG-DPPE

ICG-PEG-DSPE

Cy3-DOPE

Cy3-DPPE

版權(quán)聲明：

本平臺(tái)根據(jù)相關(guān)科技期刊文獻(xiàn)、教材以及網(wǎng)站編譯整理的內(nèi)容，僅用于對(duì)相關(guān)科學(xué)作品的介紹、評(píng)論以及課堂教學(xué)或科學(xué)研究。如有侵權(quán)，請(qǐng)聯(lián)系我們刪除。