文獻(xiàn)：In Vitro Evaluation of DSPE-PEG (5000) Amine SWCNT Toxicity and Efficacy as a Novel Nanovector Candidate in Photothermal Therapy by Response Surface Methodology (RSM)

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DSPE-PEG（5000）胺單壁碳納米管的制備與表征

檢測效率（D50）為4.03 nm、純度≥90%的碳質(zhì)材料和4-7%金屬含量的純SWCNT（Carbon Solutions，Riverside，CA，USA）。碳納米管具有疏水性，這限制了它們在生物系統(tǒng)和生物醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用。DSPE-PEG（5000）胺是PEG（聚乙二醇）的磷脂衍生物。

通過DSPE-PEG的疏水磷脂鏈與SWCNT的疏水表面之間的π-π堆積實(shí)現(xiàn)了非共價(jià)功能化。SWCNT首先用干熱滅菌（170°C 30分鐘）。將1mg無菌純SWCNT分散在約2mL無菌RPMI-1640培養(yǎng)基中，使用振幅為100%、功率為120W、脈沖為20秒、在冰上暫停10秒的探頭（UP200Ht，Hielscher，德國）對(duì)懸浮液進(jìn)行超聲處理10分鐘。另一方面，將8 mg DSPE-PEG（5000）胺（Nanocs，NY，USA）加入2 mL無菌RPMI-1640培養(yǎng)基中，在4-6°C的超聲波�。⊿onorex，Bandelin，UK）中超聲處理3次，持續(xù)15分鐘。

DSPE-PEG溶液用0.22?m纖維素膜過濾器滅菌。然后在無菌條件下進(jìn)行合成。DSPE-PEG（5000）胺/SWCNT的重量比為1比8，是根據(jù)之前的報(bào)告[36]選擇的。隨后，將上述兩種懸浮液混合，并在4-6°C的超聲波浴中超聲處理3次，持續(xù)20分鐘。然后，為了均勻化，使用100%振幅和120 W功率的超聲波處理器（UP200Ht Hielsher，Hielscher，德國）在冰上超聲處理懸浮液2分鐘（20秒脈沖和10秒暫停）。

為了從上清液中分離非PEG化的SWCNT，將懸浮液在室溫下以20000 rpm（Beckman，IN，USA）離心4小時(shí)。最后，通過分光光度法在280 nm處測定上清液中DSPE-PEG（5000）胺/SCNT的濃度[44,45]。進(jìn)行TNBSA測試以確定負(fù)載在SWCNT上的DSPE-PEG（5000）胺上的游離氨基[44,45]。還對(duì)高達(dá)600°C的純SWCNT和DSPE-PEG（5000）胺SWCNT（官能化SWCNT）進(jìn)行了熱重分析（TGA）。

在200°C至500°C之間測量了DSPE-PEG（5000）胺單壁碳納米管的逐漸重量損失。通過比較DSPE-PEG（5000）胺SWCNT與純SWCNT的損失，估計(jì)了SWCNT上PEG的負(fù)載量。

采用532nm激光和漫反射法（Nd:YL激光，Almega Thermo Nicolet，F(xiàn)isher Scientific，Pittsburgh，PA，USA）的拉曼光譜對(duì)單壁碳納米管在用DSPE-PEG（5000）胺官能化前后的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了表征。還研究了DSPE-PEG（5000）胺單壁碳納米管水分散體在室溫下2個(gè)月的穩(wěn)定性。

CNT的分散性可以從不溶性（沉淀）到可溶性（或分散）變化。制備的DSPE-PEG（5000）胺單壁碳納米管顯示出黑色均勻分散體，在合成后2個(gè)月內(nèi)沒有相分離的跡象（補(bǔ)充表S1）。原子力顯微鏡（AFM）已被用于直接評(píng)估成功的表面功能化和表面光滑度。

進(jìn)行了EDS（能量色散X射線光譜）（TESCAN，MIRA II，捷克共和國）。還進(jìn)行了XRD（X射線衍射）分析（Philips PW1730，Philips，Eindhoven，Netherlands），以研究官能化單壁碳納米管的結(jié)晶度和形成；該設(shè)備在30mA和40kV的CuKα輻射（λ=1.54056?）下運(yùn)行。數(shù)據(jù)以3°/min的掃描速率記錄在5-80°的2θ范圍內(nèi)。

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