異硫氰酸熒光素標記巖藻多糖，F(xiàn)ITC-Fucoidan的反應(yīng)步驟

巖藻多糖（Fucoidan）是一種從褐藻中提取的硫酸化多糖，具有多種生物活性，如、、抗凝血和免疫調(diào)節(jié)功能。為了實現(xiàn)其在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的可視化研究，常采用熒光標記技術(shù)，其中異硫氰酸熒光素（FITC）作為經(jīng)典的綠色熒光染料被廣泛用于標記多糖分子，生成FITC-巖藻多糖（FITC-Fucoidan），便于追蹤其細胞攝取、體內(nèi)分布及藥代動力學(xué)研究。

化學(xué)性質(zhì)及標記原理：

FITC分子含有高度活性的異硫氰酸酯官能團（–N=C=S），能與含有游離氨基的分子發(fā)生共價反應(yīng)，形成穩(wěn)定的硫脲鍵（–NH–CS–NH–）。而巖藻多糖主要由羥基和少量羧基組成，氨基含量有限，因此標記前一般需要對巖藻多糖進行氨基化改性，如通過還原胺化引入游離氨基，提升其與FITC反應(yīng)的位點和效率。

標記反應(yīng)步驟概述

巖藻多糖氨基化預(yù)處理

取適量巖藻多糖溶于適宜緩沖液（如0.1 M PBS，pH 7.4）。

使用還原胺化方法，如將多糖與氨基化試劑（乙二胺或氨基乙醇）和還原劑（NaBH3CN）共同反應(yīng)，使部分羰基或醛基轉(zhuǎn)化為氨基官能團。

反應(yīng)溫和，控制在室溫或37℃，反應(yīng)時間一般為數(shù)小時至過夜。

反應(yīng)后通過透析去除未反應(yīng)試劑和副產(chǎn)物，獲得氨基化巖藻多糖。

FITC溶液制備

取FITC粉末，溶解于無水DMSO或乙醇中，濃度一般為1-10 mg/mL。

避光操作，防止FITC降解。

偶聯(lián)反應(yīng)

將氨基化巖藻多糖溶液加入適量的緩沖液（通常為碳酸鹽緩沖液，pH 8.0-9.0），以保證氨基的親核性及FITC活性的穩(wěn)定。

緩慢滴加FITC溶液，染料與多糖的摩爾比根據(jù)預(yù)期標記度調(diào)整，一般為1:10至1:50（FITC:多糖單元）。

反應(yīng)體系在避光條件下于室溫或4℃輕輕攪拌4-12小時。

反應(yīng)終止與純化

反應(yīng)結(jié)束后，使用透析膜（分子量截斷一般為3.5-10 kDa）對反應(yīng)混合物進行透析，連續(xù)更換緩沖液數(shù)次，徹底去除未結(jié)合的游離FITC和低分子雜質(zhì)。

透析時間一般為48-72小時，確保純化徹底。

純化后樣品可凍干保存，便于長期儲存。

產(chǎn)物鑒定

采用紫外-可見光譜測定FITC的吸收峰（約490 nm）以確認標記。

熒光光譜測定標記后的多糖發(fā)射峰（約520-530 nm）驗證熒光活性。

進一步采用紅外光譜（FTIR）或核磁共振（NMR）確認共價結(jié)合結(jié)構(gòu)。

凝膠滲透色譜（GPC）用于分析標記前后分子量變化。

產(chǎn)品名稱：異硫氰酸熒光素標記巖藻多糖，F(xiàn)ITC-Fucoidan

純度：95%+

性狀：基于不同的分子量，呈白色 / 類白色固體，或液體。

溶劑：溶于二氯甲烷、DMSO、水等常規(guī)有機溶劑。

儲藏條件：-20°C干燥避光保存

包裝規(guī)格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

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