熒光染料CY5.5-巖藻多糖/褐藻糖膠，CY5.5-Fucoidan的反應(yīng)條件

CY5.5-Fucoidan 為將 Cyanine5.5（CY5.5）染料與巖藻多糖（Fucoidan）分子共價(jià)連接的中遠(yuǎn)紅外熒光探針，兼具 Fucoidan 的生物活性與 CY5.5 在 650–900 nm 成像窗口的高信噪比。Fucoidan 含多處硫酸酯和羧酸基位點(diǎn)，需通過化學(xué)衍生引入可與 CY5.5 反應(yīng)的官能團(tuán)。

常用反應(yīng)方案：

引入胺基：Fucoidan 在 MES 緩沖（pH 5.5）中與 EDC/NHS（摩爾比 1:1.2:1.2）活化羧基，隨后加入過量乙二胺，生成 Fucoidan-NH?；

偶聯(lián)反應(yīng)：在 PBS（pH 7.4）中將 Fucoidan-NH?（5 mg/mL）與 CY5.5-NHS（摩爾比約 1:0.05）于 4 °C 避光反應(yīng) 6–12 小時(shí)；

純化：用超濾離心（MWCO 30 kDa）濃縮并去除游離染料，再透析（MWCO 3.5 kDa）徹底洗脫小分子，終凍干得到灰紫色粉體。

關(guān)鍵反應(yīng)條件與優(yōu)化：

pH 控制：偶聯(lián)反應(yīng)佳 pH 為 7.2–7.8，過堿環(huán)境會(huì)加速 NHS 酯水解，過酸則影響胺基活性；

溫度與時(shí)間：4 °C 可減緩副反應(yīng)，保證多糖鏈穩(wěn)定；反應(yīng)時(shí)間 6–12 小時(shí)為宜，過長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致染料水解；

染料/多糖比：控制在 0.03–0.1（摩爾比）可獲得 2–5 個(gè)染料/100 kDa 的標(biāo)記度；

去除游離染料：多次超濾與透析可使游離 CY5.5 含量降至＜5%（UV/Vis 檢測(cè)）。

表征方法包括：

UV/Vis 光譜：在 675 nm 處出現(xiàn) CY5.5 吸收峰，A???/A??? 比值反映標(biāo)記度；

熒光光譜：激發(fā) 675 nm，發(fā)射 695–720 nm；

?H NMR：可見多糖主鏈信號(hào)與 CY5.5 苯并環(huán)信號(hào)共存；

GPC：標(biāo)記后分子量分布略有右移，表征偶聯(lián)效率；

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：在 HeLa、RAW264.7 等細(xì)胞中 10–50 μg/mL 濃度孵育 1–4 小時(shí)，熒光顯微鏡下可清晰觀察胞內(nèi)信號(hào)，無明顯細(xì)胞（CCK-8 實(shí)驗(yàn)）。

產(chǎn)品名稱：料CY5.5-巖藻多糖/褐藻糖膠，CY5.5-Fucoidan

純度：95%+

性狀：基于不同的分子量，呈白色 / 類白色固體，或液體。

溶劑：溶于二氯甲烷、DMSO、水等常規(guī)有機(jī)溶劑。

儲(chǔ)藏條件：-20°C干燥避光保存

包裝規(guī)格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

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僅供科研，不能用于人體實(shí)驗(yàn)AXC.2025.05.23