文獻：Liver-Targeted Combination Therapy Basing on Glycyrrhizic Acid-Modified DSPE-PEG-PEI Nanoparticles for Co-delivery of Doxorubicin and Bcl-2 siRNA

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作者：G Tian，R Pan，B Zhang，M Qu，J Wu

制備普通膠束和CCR2靶向膠束如下：

將mPEG-DSPE/NHS-PEG-DSPE/DiD（98/2/0.5）溶解在氯仿中，并與溶解在甲醇中的CCR2拮抗劑混合。將小分子拮抗劑CCR2以1:22的摩爾比加載到脂質(zhì)膠束中，相當于4.5%w/w的加載量。通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，得到脂質(zhì)膜。

用PBS對干燥的薄膜進行再水化。

膠束含有遠紅色熒光親脂性DiD，在再水化時，DiD會結合到膠束的親脂性區(qū)域。然后在室溫下將mPEG-DSPE膜和mPEG-DSPE/NHS-PEG-DSPE混合物超聲處理5分鐘。mPEG-DSPE/NHS-PEG-DSPE混合物與抗CCR2抗體一起孵育4小時，以與NHS-PEG-DSPE脂質(zhì)結合。PEG-DSPE膠束含有0.3摩爾%的抗CCR2抗體。

使用Nanobrook Omni（Brookhaven Instruments，Holtsville，NY，USA）通過動態(tài)光散射（DLS）測量了普通膠束和CCR2靶向膠束的粒徑和ζ電位。

通過流式細胞術測量DiD標記的CCR2靶向和平膠束與RAW 264.7細胞的結合和內(nèi)化。共有106個細胞在4°C下與膠束一起孵育1小時，并在測量前洗滌三次。來自Miltenyi Biotec的MACSQuant用于644/663 nm ex/em波長的流式細胞術。

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