文獻(xiàn):SREKA-targeted liposomes for highly metastatic breast cancer therapy
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作者:Balázs Vári,Levente Dókus,Adina Borbély,Anikó Gaál,Diána Vári-Mez?,Ivan Ran?elovi?
通過脂質(zhì)膜水合和擠出法制備了含CREKA/SREKA肽的脂質(zhì)體。將DSPE-PEG-CREKA(5mg/mL)和DSPE-PEG-SREKA(10mg/mL)的乙腈儲(chǔ)備溶液加入到含有溶解在氯仿中的HSPC、膽固醇、DSPE-PEG2000的脂質(zhì)混合物中,并在N2氣流下干燥成薄脂質(zhì)膜,然后在真空下孵育過夜以去除殘留溶劑。
接下來,0.25?M、 使用pH=6.5的硫酸銨溶液使脂質(zhì)膜水合,使總脂質(zhì)濃度達(dá)到16?mg/mL(9.6mg/mL HSPC,3.2?mg/mL膽固醇和3.2?mg/mL DSPE-PEG2000或肽修飾的PEG脂質(zhì)。
然后將混合物保持在60?30°C?使用磁熱板(IKA RET control visc,IKA Werke GmbH&Co.KG,Staufen,德國(guó))。將得到的多層囊泡(MLV)懸浮液進(jìn)行五次凍融循環(huán)(每次5分鐘,在液氮中冷凍,在60℃下解凍)?在60℃下擠壓10次之前?°C至100?nm聚碳酸酯膜過濾器(Whatman,Springfield Mill,UK)。使用PD-10柱(Sephadex G-25,Cytiva,Little Chalfont,England)將緩沖液改為l-組氨酸/蔗糖緩沖液(10mM/10%,pH=6.5)。
接下來,將柔紅霉素(7 mg/mL,0.9%NaCl溶液)加入脂質(zhì)體(3.5 mL脂質(zhì)體樣品+1.5?mL 7?mg/mL柔紅霉素溶液),然后孵育1小時(shí)?h 60時(shí)?°C.根據(jù)制造商的說明,使用PD-10或G-25 midiTrap脫鹽柱去除未包封的柔紅霉素藥物。還用與Lipo-25S樣品相對(duì)應(yīng)的脂質(zhì)組合物制備了無藥物脂質(zhì)體制劑,以下稱為E-Lipo-25S。
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