文獻(xiàn)：iRGD通過增強(qiáng)胃癌淋巴細(xì)胞浸潤與PD-1敲除免疫療法產(chǎn)生協(xié)同作用

鏈接：https://www.nature.com/articles/s41467-019-09296-6

作者：丁乃清,鄒正云,沙惠子,舒蘇,錢漢清,孟凡艷,陳方軍,杜世耀,周淑娟,陳紅張蓮如,鞠陽賈偉&劉寶瑞 

節(jié)選：

DSPE-PEG-iRGD修飾T細(xì)胞

為了將iRGD固定在T細(xì)胞膜上，我們在肽的C末端引入了一個半胱氨酸殘基。游離的巰基使得iRGD能夠通過邁克爾加成反應(yīng)連接到2-二硬脂酰-sn-甘油-3-磷酸-乙醇胺-N-馬來酰亞胺（DSPE-PEG-Mal）的馬來酰亞胺基團(tuán)上（圖 1a）。MALDI-TOF和1 H NMR分析表明成功制備了DSPE-PEG-iRGD（圖 1b和補(bǔ)充圖 1a）。采用相同方法構(gòu)建了DSPE-PEG-iRGD-FAM，用于某些實驗。結(jié)果表明，所得 DSPE-PEG-iRGD-FAM 在共培養(yǎng)過夜后能自發(fā)地從溶液轉(zhuǎn)移到 T 細(xì)胞表面（圖 1c和補(bǔ)充圖 1b），而不會影響細(xì)胞活力、表型或效應(yīng)功能（補(bǔ)充圖 2a-e）。此外，20 ?g DSPE-PEG-iRGD 可 100% 覆蓋 10 6 個活化的 T 細(xì)胞（圖 1d和補(bǔ)充圖 1c）。由于結(jié)合穩(wěn)定性是細(xì)胞表面修飾的關(guān)鍵參數(shù)，我們研究了 DSPE-PEG-iRGD-FAM 的細(xì)胞表面動力學(xué)。培養(yǎng) 60 小時后，DSPE-PEG-iRGD-FAM 修飾的 T 細(xì)胞的相對熒光強(qiáng)度下降至 50%，這大約是淋巴細(xì)胞的倍增時間（圖 1e）。該結(jié)果表明我們所應(yīng)用的細(xì)胞表面改性平臺具有良好的穩(wěn)定性。

DSPE-PEG-iRGD的合成及其細(xì)胞表面修飾。a脂質(zhì)偶聯(lián)iRGD的合成示意圖。b MALDI -TOF表征DSPE-PEG-Mal和DSPE-PEG-iRGD構(gòu)建體。分子量的差異表明iRGD和DSPE-PEG-Mal成功連接。c單獨(dú)的T細(xì)胞（灰色）以及與iRGD-FAM（藍(lán)色）和DSPE-PEG-iRGD-FAM（紅色）孵育的細(xì)胞的流式細(xì)胞術(shù)直方圖。d使用流式細(xì)胞術(shù)分析DSPE-PEG-iRGD-FAM修飾細(xì)胞的百分比。e 使用流式細(xì)胞術(shù)分析培養(yǎng)期間FAM-DSPE-PEG-iRGD修飾細(xì)胞的相對平均熒光強(qiáng)度的變化。數(shù)據(jù)表示平均值±標(biāo)準(zhǔn)差；n ?= 3. T + iRGD，T 細(xì)胞與游離 iRGD 共同給藥；T-iRGD，經(jīng) DSPE-PEG-iRGD 修飾的 T 細(xì)胞

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