文獻(xiàn)：

Targeting Fluorescence Imaging of RGD-Modified Indocyanine Green Micelles on Gastric Cancer

文獻(xiàn)鏈接：

https://www.frontiersin.org/journals/bioengineering-and-biotechnology/articles/10.3389/fbioe.2020.575365/full

作者：

Jun Shao&#x;Jun Shao1?Xiaoming Zheng&#x;Xiaoming Zheng1?Longbao FengLongbao Feng2Tianyun LanTianyun Lan3Dongbing DingDongbing Ding1Zikai CaiZikai Cai1Xudong ZhuXudong Zhu1Rongpu LiangRongpu Liang1Bo Wei*Bo Wei1*

細(xì)胞系和小鼠

本文使用SGC7901細(xì)胞、小鼠成纖維細(xì)胞L929。SGC7901細(xì)胞在RPMI 1640中培養(yǎng)，而L929細(xì)胞在37°C、含5%CO2的加濕氣氛中在DMEM中培養(yǎng)。所有培養(yǎng)基均補(bǔ)充了10%FBS、1%青霉素和1%鏈霉素。

細(xì)胞攝取

通過激光共聚焦熒光顯微鏡觀察細(xì)胞的內(nèi)化和分布。簡(jiǎn)而言之，將SGC7901細(xì)胞接種在35 mm細(xì)胞培養(yǎng)皿（Nest，801002）中，培養(yǎng)24小時(shí)以進(jìn)行細(xì)胞附著。每皿細(xì)胞密度為5×104。

接下來，用含有以下成分的新無血清培養(yǎng)基替換培養(yǎng)基DSPE-PEG@ICG和DSPE-PEG-RGD@ICG（等效ICG濃度：1mg/ml）。孵育4和12小時(shí)后，用PBS洗滌細(xì)胞，并用4%多聚甲醛固定。

隨后，細(xì)胞用10μg/ml DAPI染色10分鐘，并用PBS洗滌。最后，使用激光共聚焦熒光顯微鏡（Zeiss LSM 710，德國(guó)）觀察膠束的結(jié)合和內(nèi)化。核的參數(shù)設(shè)置為λex 405 nm，ICG的參數(shù)設(shè)置在λex 633 nm。

為了進(jìn)一步定量分析，將1×105個(gè)SGC7901細(xì)胞接種在每孔12孔板中，并用含有以下成分的無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)DSPE-PEG@ICG和DSPE-PEG-RGD@ICG（等效ICG濃度：1mg/ml）處理12小時(shí)。在預(yù)定時(shí)間，收獲細(xì)胞并用PBS洗滌。然后，將細(xì)胞重新懸浮在PBS中，并立即通過Accuri流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行定量分析。

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