蛋白質(zhì)的熒光標(biāo)記技術(shù)
蛋白熒光標(biāo)記是將熒光分子共價(jià)連接到蛋白質(zhì)上,用于成像追蹤、結(jié)構(gòu)分析、相互作用研究、流式分析、ELISA與生物傳感等。常見目標(biāo)蛋白包括抗體、酶、膜蛋白、激素與重組蛋白等。
標(biāo)記策略:
賴氨酸側(cè)鏈標(biāo)記(常見):
使用NHS-FITC、NHS-Alexa Fluor等;
標(biāo)記簡(jiǎn)便,但不具位點(diǎn)選擇性;
半胱氨酸特異標(biāo)記:
使用Maleimide熒光探針(如Alexa Fluor 488-Maleimide);
提供位點(diǎn)選擇性修飾;
定點(diǎn)標(biāo)簽標(biāo)記(如His-tag、Avi-tag):
可用帶親和標(biāo)簽的熒光探針/鏈霉親和素耦聯(lián)染料;
標(biāo)記度控制與檢測(cè):
調(diào)控反應(yīng)摩爾比;
采用分光光度法(280/λmax)測(cè)定修飾率;
SDS-PAGE、質(zhì)譜驗(yàn)證完整性;
推薦熒光試劑與產(chǎn)品:
FITC、TRITC、Rhodamine B(經(jīng)典綠色/紅色標(biāo)記)
Alexa Fluor系列(488、555、647):高亮度與穩(wěn)定性
Cy3、Cy5、Cy7 NHS/Maleimide:適合蛋白成像與流式
Dylight系列染料:廣譜應(yīng)用
熒光標(biāo)記鏈霉親和素/蛋白A/G:用于間接標(biāo)記系統(tǒng)
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