巰基-透明質(zhì)酸(HA-SH, MW: 70K)
巰基化透明質(zhì)酸(Hyaluronic Acid Thiol, HA-SH)是將天然透明質(zhì)酸(分子量70,000 Da)引入巰基(-SH)修飾的一種功能化多糖,用于構(gòu)建可交聯(lián)水凝膠、靶向載藥系統(tǒng)或生物材料修飾。
合成方法:
巰基化主要通過羧基活化與巰基小分子的接枝反應(yīng)實(shí)現(xiàn)。以下是常見的合成步驟:
原料準(zhǔn)備:
透明質(zhì)酸鈉鹽(MW ≈ 70 kDa);
巰基引入試劑:半胱胺鹽酸鹽、2-巰基乙胺、L-半胱氨酸等;
活化劑:EDC(1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺)和 NHS(N-羥基琥珀酰亞胺)。
活化反應(yīng):
將HA溶于MES緩沖液(pH 5.5),加入EDC/NHS活化羧基,使其形成活性酯。
巰基引入:
加入巰基引入試劑(如半胱胺),在pH 6~7條件下緩慢攪拌反應(yīng)12–24小時(shí)。反應(yīng)過程中應(yīng)避免氧化,可在氮?dú)庀逻M(jìn)行。
純化與凍干:
通過透析袋(分子截留約10kDa)進(jìn)行除雜,冷凍干燥得到HA-SH產(chǎn)物。
注意事項(xiàng):
巰基容易氧化,應(yīng)避免空氣接觸;
可加入DTT等還原劑穩(wěn)定巰基;
巰基含量可通過Ellman’s法定量測(cè)定。
應(yīng)用方向:
廣泛用于構(gòu)建還原敏感水凝膠、金屬納米粒子包覆、多肽偶聯(lián)載體、生物傳感器等。
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