納米膠束是通過薄膜水合法制備的。將聚乙二醇化的脂質(zhì)基單體（DMPE-PEG2000、DPPE-PEG 2000、DSPE-PEG2000，DOPE-PEG2000和DOTAP）（10mg）溶解在氯仿（2mL）中，并在45°C的低壓下干燥以形成薄膜。然后在55°C下用PBS（3 mL）重新水合，然后在室溫下以120 W的功率進(jìn)行浴超聲波處理5分鐘，形成納米膠束：MDMPE-PEG。MDPPE-PEG、MDSPE-PEG、MDOPE-PEG和MDOTAP。

對于M-P12的制備，將Pep12（CLPFD）溶液（PBS中的2 mL和2 mg mL-1）以1.5:1的摩爾比加入納米膠束中（Pep12:DSPE-PEG2000-MAL）。

Pep12的巰基和DSPE-PEG2000-MAL的馬來酰亞胺基團(tuán)之間的偶聯(lián)是通過Michael加成反應(yīng)在室溫下在黑暗中溫和攪拌24小時完成的。將所得混合物用PBS（pH 7.4）透析24小時，以去除未偶聯(lián)的Pep12。

通過分別用Pep13、PepTT和PepSS替換肽Pep12，應(yīng)用相同的程序制備其他肽修飾的脂質(zhì)核納米膠束M-P13、M-TT和M-SS。為了構(gòu)建P-P12，將由DSPE-PEG2000-MAL制成的膠束核替換為由PLA2000-PEG3400-MAL制備的聚合物核。

為了制備DiD標(biāo)記的M-12，在薄膜水合法中加入DiD（38.4?g）以制備納米膠束。這些負(fù)載DiD的納米膠束用Pep12修飾，然后透析（<3500 Da）24小時，以在進(jìn)一步實驗之前去除多余的DiD。在所有細(xì)胞和體內(nèi)實驗之前，所有納米膠束都經(jīng)過過濾滅菌（0.22?m，Millipore，Billerica，MA，USA）。

采用薄膜水合法制備Lipo-P12。將大豆卵磷脂（180mg）和膽固醇（60mg）溶解在氯仿中，完全去除溶劑以獲得薄膜。將其在PBS（10 mL，pH 7.4）中再水化，并在室溫下用探頭超聲波儀（Scientz，中國寧波）在150 W下超聲處理溶液5分鐘，以獲得脂質(zhì)體（Lipo）。

將未改性的脂質(zhì)體與DSPE-PEG2000-Pep12在60°C下孵育2小時，得到Lipo-P12。所有脂質(zhì)體均通過過濾（0.22?m，Millipore，Billerica，MA，USA）滅菌，在使用前以14000 rpm離心2小時，并在4°C下儲存。

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