AF350 NHS,全稱為 Alexa Fluor 350 NHS Ester,是一種以 Alexa Fluor 350 為核心熒光團的 活性酯類熒光染料,用于與含伯胺基(–NH?)的生物分子(如蛋白質(zhì)、肽、寡核苷酸等)發(fā)生高效共價結(jié)合。
其結(jié)構(gòu)中的 N-羥基琥珀酰亞胺酯(NHS ester)官能團具有良好的反應(yīng)性,可在溫和條件下快速與靶分子的氨基發(fā)生酰胺化反應(yīng),從而形成穩(wěn)定的熒光標(biāo)記物。
Alexa Fluor 350 是一種藍光激發(fā)的熒光染料,具有優(yōu)異的亮度、光穩(wěn)定性和親水性,廣泛應(yīng)用于多色熒光標(biāo)記體系中,尤其在紫外通道(DAPI/FITC/Texas Red)的共聚焦顯微成像中占據(jù)重要地位。
熒光性質(zhì)
激發(fā)波長(Ex):346 nm
發(fā)射波長(Em):442 nm
發(fā)射顏色:亮藍色
激發(fā)光源兼容性:紫外激光(例如 350–360 nm UV 激發(fā))
發(fā)射光譜范圍:約 420–470 nm
Alexa Fluor 350 擁有比傳統(tǒng)的 DAPI、AMCA 等藍色染料更高的量子產(chǎn)率和光穩(wěn)定性,適合用于多重染色體系中的“紫外通道”或藍光通道,與綠色(如 AF488)、橙紅色(如 AF594)、遠紅色(如 AF647)熒光標(biāo)記物組合使用,光譜分離性強,互不干擾。
應(yīng)用領(lǐng)域
蛋白質(zhì)與抗體標(biāo)記
AF350 NHS 可用于標(biāo)記抗體、酶、載體蛋白等,制作熒光抗體或檢測探針,尤其適合需要藍光激發(fā)或多重?zé)晒鈱嶒灥膽?yīng)用。
在 ELISA、免疫印跡(Western blot)、免疫細(xì)胞化學(xué)(ICC)、免疫組織化學(xué)(IHC)等實驗中,可與 AF488、AF594 等染料協(xié)同使用,構(gòu)建多通道檢測體系。
寡核苷酸與探針標(biāo)記
可用于標(biāo)記氨基修飾的寡核苷酸、DNA、RNA,用于分子雜交、FISH、qPCR 或納米探針構(gòu)建。
適合原位雜交實驗中的早期核酸定位染色或探針質(zhì)量控制。
流式細(xì)胞術(shù)與熒光成像
藍色激發(fā)通道可避免與綠色/紅色染料重疊,實現(xiàn)多色分辨。
特別適合細(xì)胞周期檢測、DNA 量分析、細(xì)胞膜或核染色。
納米材料功能化
可與氨基修飾的納米顆粒、聚合物、表面包覆材料共價結(jié)合,實現(xiàn)熒光標(biāo)記或跟蹤。
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