5(6)-羧基二乙酸熒光素琥珀酰亞胺酯（5(6)-CFDA-SE）是一種熒光探針和生物標(biāo)記試劑，常用于細(xì)胞增殖追蹤、細(xì)胞活性分析以及細(xì)胞歸巢實(shí)驗(yàn)。它結(jié)合了幾種關(guān)鍵的功能基團(tuán)：熒光素（Fluorescein）的熒光特性、二乙酸酯基團(tuán)的細(xì)胞膜通透性，以及琥珀酰亞胺酯（NHS酯）的活潑偶聯(lián)性能。憑借這些特性，5(6)-CFDA-SE成為流式細(xì)胞術(shù)、熒光顯微鏡以及多種生物實(shí)驗(yàn)中不可或缺的工具。

常用名 5(6)-羧基二乙酸熒光素琥珀酰亞胺酯(CFDA)

英文名 5-Carboxyfluorescein diacetate N-succinimidyl ester

CAS號(hào) 150347-59-4

分子量 557.461

密度 1.6±0.1 g/cm3

沸點(diǎn) 757.9±70.0 °C at 760 mmHg

分子式 C29H19NO11

熔點(diǎn) 152-154?C(lit.)

閃點(diǎn) 412.2±35.7 °C

工作原理與反應(yīng)機(jī)制

5(6)-CFDA-SE的核心應(yīng)用機(jī)制基于以下幾個(gè)步驟：

1. 膜通透性

二乙酸酯基團(tuán)使分子疏水，能夠輕松穿透細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部。

2. 酯酶切割

進(jìn)入細(xì)胞后，胞內(nèi)酯酶迅速水解二乙酸酯基團(tuán)，釋放出羧基熒光素，產(chǎn)生帶負(fù)電荷的極性分子，困留在細(xì)胞內(nèi)，無法自由擴(kuò)散出去。

3. NHS酯偶聯(lián)

羧基熒光素在細(xì)胞內(nèi)與蛋白質(zhì)中的伯胺基團(tuán)（例如賴氨酸殘基）發(fā)生共價(jià)結(jié)合，形成穩(wěn)定的酰胺鍵。這種共價(jià)標(biāo)記確保熒光信號(hào)在細(xì)胞內(nèi)長(zhǎng)期保留。

這種多步驟機(jī)制是CFDA-SE相對(duì)于其他熒光染料的重要優(yōu)勢(shì)，使其能夠長(zhǎng)期追蹤細(xì)胞，而不被洗脫或稀釋。

主要應(yīng)用

細(xì)胞增殖分析

流式細(xì)胞術(shù)常用5(6)-CFDA-SE對(duì)細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記，通過檢測(cè)熒光強(qiáng)度的減半來定量分析細(xì)胞的分裂次數(shù)。

細(xì)胞遷移與歸巢研究

在動(dòng)物模型中，標(biāo)記后的細(xì)胞可以追蹤其遷移和定位，用于研究免疫細(xì)胞、干細(xì)胞在體內(nèi)的分布。

細(xì)胞活性檢測(cè)

用于檢測(cè)細(xì)胞存活、細(xì)胞膜完整性以及酯酶活性，是活細(xì)胞檢測(cè)的重要指標(biāo)。

細(xì)胞形態(tài)學(xué)研究

高亮度熒光信號(hào)適合共聚焦顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和分布。

多色染色

由于其激發(fā)/發(fā)射光譜不同于其他常用染料（如PE、APC），CFDA-SE可與多種熒光探針組合，實(shí)現(xiàn)多色標(biāo)記。

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