熒光標(biāo)記修飾靶向肽定制技術(shù)
靶向肽（如RGD、GE11、F3、LyP-1等）能高親和力識(shí)別特定細(xì)胞表面受體（如Integrin αvβ3、EGFR、nucleolin等），在藥物遞送、成像探針、細(xì)胞識(shí)別中應(yīng)用廣泛。通過(guò)熒光標(biāo)記，可實(shí)現(xiàn)對(duì)肽在體內(nèi)/體外行為的可視化監(jiān)測(cè)。
1. 常用熒光染料種類
類型 | 波長(zhǎng)范圍 | 特點(diǎn) |
FITC（異硫氰酸熒光素） | Ex/Em ≈ 495/520 nm | 常用，價(jià)格低，易連接 |
Cy系列（Cy3/Cy5/Cy7） | Ex/Em ≈ 550–800 nm | 明亮、信噪比高，適合活體成像 |
Rhodamine B/TRITC | 550–600 nm | 穩(wěn)定性好 |
ICG（吲哚菁綠） | ≈ 780/810 nm | 近紅外成像、穿透力強(qiáng) |
Alexa Fluor 系列 | 多波段，穩(wěn)定性佳 | 適用于細(xì)胞和動(dòng)物成像 |
2. 標(biāo)記策略
a. N-末端標(biāo)記
將熒光染料（如FITC-NHS、Cy5-NHS）與多肽N端氨基發(fā)生酰胺鍵偶聯(lián)；
優(yōu)點(diǎn)：反應(yīng)高效，不干擾側(cè)鏈活性。
b. C-端/賴氨酸側(cè)鏈標(biāo)記
靶向位點(diǎn)定制控制，避免影響受體結(jié)合位點(diǎn)；
使用修飾氨基酸位點(diǎn)選擇性標(biāo)記。
c. Click化學(xué)標(biāo)記
炔基化多肽與疊氮熒光團(tuán)反應(yīng)；
選擇性好、位點(diǎn)精準(zhǔn)，適合復(fù)雜多肽體系。
d. 雙標(biāo)/多標(biāo)
引入多個(gè)賴氨酸或PEG支鏈后加載不同染料；
可實(shí)現(xiàn)FRET或多通道成像。
3. 合成流程（以FITC標(biāo)記為例）
多肽固相合成完成后，保留N端或Lys側(cè)鏈氨基；
在弱堿緩沖液中加入FITC，避光攪拌數(shù)小時(shí)；
反應(yīng)后純化（HPLC）；
驗(yàn)證熒光強(qiáng)度、純度（UV、質(zhì)譜、熒光光譜）；
4. 應(yīng)用領(lǐng)域
活細(xì)胞靶向成像（RGD-FITC, GE11-Cy5等）；
腫瘤組織識(shí)別；
靶向載體構(gòu)建（如靶向脂質(zhì)體/納米粒）；
熒光探針（與金屬離子或受體反應(yīng)）；
流式檢測(cè)、共聚焦顯微成像。
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