化學(xué)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)
sulfo-Cyanine5.5 dUTP是含有熒光染料sulfo-Cyanine5.5修飾的脫氧尿苷三磷酸(dUTP)衍生物。其基本結(jié)構(gòu)由以下部分組成:
脫氧尿苷三磷酸(dUTP):是DNA合成的原料之一,結(jié)構(gòu)包含脫氧核糖、尿嘧啶堿基及三磷酸基團(tuán)。
sulfo-Cyanine5.5熒光染料:一種水溶性、帶負(fù)電荷的近紅外熒光染料,具有光穩(wěn)定性和高量子產(chǎn)率,發(fā)射波長(zhǎng)約為695 nm,適合深紅至近紅外成像。
連接基團(tuán):通常通過(guò)共價(jià)鍵將sulfo-Cyanine5.5連接到dUTP分子上的核苷堿基或糖部分,使得染料能夠隨DNA鏈摻入。
功能和用途
sulfo-Cyanine5.5 dUTP作為一種標(biāo)記的核苷酸,主要功能是在DNA合成過(guò)程中被DNA聚合酶摻入新合成的DNA鏈中,實(shí)現(xiàn)DNA的熒光標(biāo)記和檢測(cè)。它的廣泛應(yīng)用包括:
DNA合成與擴(kuò)增檢測(cè)
在PCR、核酸擴(kuò)增技術(shù)(如qPCR)或體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中摻入sulfo-Cyanine5.5 dUTP,能直接在擴(kuò)增產(chǎn)物中引入熒光標(biāo)簽,無(wú)需后續(xù)標(biāo)記步驟,簡(jiǎn)化流程并提升效率。
熒光原位雜交(FISH)
通過(guò)使用sulfo-Cyanine5.5 dUTP標(biāo)記的探針,可以高靈敏度地檢測(cè)染色體上的特定序列,實(shí)現(xiàn)細(xì)胞核或組織切片中目標(biāo)DNA的定位和定量。
基因表達(dá)分析與單分子檢測(cè)
結(jié)合熒光原位擴(kuò)增技術(shù),可利用該染料的近紅外發(fā)射優(yōu)勢(shì),實(shí)現(xiàn)低背景、高信噪比的基因表達(dá)分析,適合單分子水平研究。
細(xì)胞和組織成像
其近紅外光譜特性使其適合活細(xì)胞及活體成像,穿透力強(qiáng),背景干擾少,特別適合復(fù)雜生物樣本的熒光成像。
特點(diǎn)
近紅外激發(fā)與發(fā)射波長(zhǎng)
sulfo-Cyanine5.5 dUTP在近紅外區(qū)發(fā)射,減少了細(xì)胞自發(fā)熒光的干擾,提高信號(hào)的特異性和靈敏度。
水溶性好,生物相容性佳
sulfo基團(tuán)增加染料的親水性,避免染料聚集,提高標(biāo)記的均一性和穩(wěn)定性,適合生物體系使用。
高光穩(wěn)定性和量子效率
該染料具有較高的光穩(wěn)定性和亮度,適合長(zhǎng)時(shí)間熒光成像和高靈敏度檢測(cè)。
直接摻入DNA,簡(jiǎn)化操作
通過(guò)DNA聚合酶直接摻入,無(wú)需后續(xù)化學(xué)反應(yīng)或標(biāo)記步驟,便于快速檢測(cè)。
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