Cyanine5-PNA,cy5-花生凝集素的合成過程研究
Cyanine5-PNA(Cy5-Peanut Agglutinin)是將熒光染料Cyanine5(Cy5)共價(jià)連接至花生凝集素(PNA, Peanut Agglutinin)上的熒光探針,常用于檢測細(xì)胞表面O暴露的 β-Gal(1-3)GalNAc 結(jié)構(gòu)。其特異性結(jié)合能力使其成為研究糖蛋白分布、糖基轉(zhuǎn)移酶活性和癌變相關(guān)糖鏈變化的重要工具。
合成該標(biāo)記物的過程主要包括以下步驟:
純化PNA蛋白:從Arachis hypogaea中提取得到PNA或通過重組表達(dá)獲得,使用鹽析、層析(凝膠過濾或親和層析)純化得到單體或二聚體形式。
標(biāo)記反應(yīng):將Cy5-NHS酯溶解于無水DMSO或DMF中,并緩慢滴加至含有PNA蛋白的堿性緩沖液(如pH 8.3的碳酸鹽緩沖液)中,使其與蛋白表面賴氨酸殘基上的氨基反應(yīng),生成酰胺鍵。通常反應(yīng)在4–25°C下進(jìn)行2–4小時(shí),避光操作。
去除游離染料:使用凝膠滲透色譜(如Sephadex G-25)、透析或超濾去除未反應(yīng)的游離Cy5。
表征:通過紫外-可見吸收法測定Cy5的連接度(Dye-to-protein ratio),并通過SDS-PAGE(含近紅外掃描)及質(zhì)譜確認(rèn)標(biāo)記完整性?墒褂锰撬馗偁幰种茖(shí)驗(yàn)驗(yàn)證其結(jié)合位點(diǎn)特異性未受干擾。
Cy5-PNA 在共聚焦顯微鏡下發(fā)出紅色熒光,可高分辨率顯示細(xì)胞膜或胞外糖結(jié)構(gòu),
產(chǎn)品名稱:Cyanine5-PNA,cy5-花生凝集素
純度:95%+
性狀:基于不同的分子量,呈白色 / 類白色固體,或液體。
溶劑:溶于二氯甲烷、DMSO、水等常規(guī)有機(jī)溶劑。
儲(chǔ)藏條件:-20°C干燥避光保存
包裝規(guī)格:50mg 100mg 250mg 500mg(按需提供)
pg電子官方生物供應(yīng)近紅外熒光花菁染料標(biāo)記各種官能團(tuán)的定制服務(wù),如活性酯(NHS酯)、馬來酰亞胺(MAL)、疊氮(N?)、炔基(alkyne)等,便于與蛋白質(zhì)、肽、多糖、抗體、寡核苷酸、納米顆粒等共價(jià)偶聯(lián)。
推薦產(chǎn)品:
二苯并環(huán)辛炔-二硫鍵-馬來酰亞胺
DBCO-SS-Mal
DBCO-BODIPY FL
CAS:2093197-94-3
氟化硼二吡咯二苯并環(huán)辛炔
AF488-Phalloidin
AF488標(biāo)記鬼筆環(huán)肽
僅供科研,不能用于人體實(shí)驗(yàn)AXC.2025.06.23