產(chǎn)品名稱：透明質(zhì)酸-熒光素，HA-FITC的合成方法

合成方法

1 核心合成路線：碳二亞胺法（EDC/NHS活化）

步驟1：HA羧基的活化

試劑：

HA（分子量100 kDa，100 mg）、1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺（EDC，50 mg）、N-羥基琥珀酰亞胺（NHS，30 mg）、MES緩沖液（0.1 M，pH 5.5）。

反應(yīng)條件：

HA溶于MES緩沖液（10 mL），加入EDC和NHS，室溫 攪拌 30分鐘，生成 NHS酯中間體（通過?H NMR驗(yàn)證δ≈2.8 ppm處的琥珀酰亞胺質(zhì)子）。

步驟2：FITC的偶聯(lián)

試劑：

FITC（20 mg）、DMSO（2 mL）。

反應(yīng)條件：

將FITC的DMSO溶液逐滴加入活化的HA溶液中，避光 攪拌 4小時(shí)，生成 HA-FITC（通過UV-Vis光譜驗(yàn)證495 nm處的吸收峰）。

反應(yīng)液經(jīng) 透析（MWCO 10 kDa） 去除未反應(yīng)的FITC和副產(chǎn)物，冷凍干燥得到黃色固體（產(chǎn)率 85%）。

2 替代路線：直接偶聯(lián)法（低效率）

試劑：

HA（100 mg）、FITC（20 mg）、碳酸氫鈉（NaHCO?，50 mg）、DMSO/水（1:1，v/v）。

反應(yīng)條件：

HA溶于混合溶劑，加入FITC和NaHCO?，室溫 攪拌 24小時(shí)，偶聯(lián)效率 <30%（因FITC與羧基反應(yīng)活性低）。

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