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          用于膜功能研究的DOPE-PEG-Biotin修飾巨型囊泡制備工藝
          發(fā)布時間:2025-07-18     作者:kx   分享到:

          文獻:脂質(zhì)膜上的微粒組裝途徑

          鏈接:https://www.cell.com/biophysj/fulltext/S0006-3495(17)30844-5

          作者:卡斯珀·范德韋爾1 ? 多麗絲·海因里希1,2 ? 丹妮拉·J·克拉夫特1 

          節(jié)選:

          膜制備

          采用標(biāo)準(zhǔn)電膨脹技術(shù)(14)制備了直徑在5至20微米之間的巨型單層囊泡(GUVs)。在氯仿中配制了2克/升的脂質(zhì)混合物,其中包含97.5重量%的二油酰磷脂酰膽堿(DOPC)、2.0重量%的聚乙二醇-聚氧乙烯醚-生物素(DOPE-PEG-biotin)和0.5重量%的聚乙二醇-羅丹明(DOPE-rhodamine)。接下來,在兩個6平方厘米的氧化銦錫涂層載玻片(15–25 μm,Sigma-Aldrich)上各干燥10微升該溶液,隨后浸入含有100毫摩爾葡萄糖和0.3毫摩爾疊氮化鈉的49:51重水:水溶液中。為誘導(dǎo)囊泡形成,電*在10赫茲下施加1.1伏(均方根值)電壓2小時。由此獲得的囊泡在室溫下儲存在牛血清白蛋白包被的小瓶中。為減少較小囊泡的數(shù)量,我們在使用前直接用Whatmann 5.0微米孔徑的硝酸纖維素濾膜過濾GUV溶液(15)。對于膜管化實驗,使用神經(jīng)節(jié)苷脂GM1和染料霍亂毒素488對外部膜葉進行染色,具體步驟如下:將上述氯仿中的脂質(zhì)混合物轉(zhuǎn)移到甲醇中,加入0.2重量%的GM1。然后按上述方法進行電膨脹。在樣品制備前,向磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)中加入50毫克/升的霍亂毒素488,僅對囊泡的外部葉進行染色。

          DOPE-PEG-Biotin

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