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          綠色熒光素標(biāo)記牛血清白蛋白BSA-FITC合成詳細(xì)步驟
          發(fā)布時(shí)間:2020-08-25     作者:Harry   分享到:

          綠色熒光標(biāo)記牛血清白蛋白的方法可以參考熒光標(biāo)記抗體的方法,因?yàn)榭贵w也是一種蛋白,具體方法如下:


          準(zhǔn)備材料:


          1、異硫氰酸熒光素(FluoresceinIsothiocyanate,FITC)異構(gòu)體IIsomerI),M.W389.4發(fā)射光譜(吸收光譜)493nm,熒光光譜550nm

          2、牛血清白蛋白(BSA),M.W68000,純度98%。(AlbuminBovineSerum

          3、標(biāo)記緩沖液:0.5MpH9.5C.B,洗脫液:0.01MpH7.2PBS


          標(biāo)記流程:


          1:將待交聯(lián)的蛋白(濃度?1mg/ml)對(duì)交聯(lián)反應(yīng)液透析三次4 ℃,至pH=9.0。交聯(lián)反應(yīng)液配制方法:7.56g NaHCO3,1.06g Na2CO3,7.36g NaCl,加水定容至1 L。

          2:將FITC溶于DMSO中,濃度為1mg/ml。每次交聯(lián)使用的FITC均應(yīng)新鮮配制,避光。

          3:按P:F(蛋白質(zhì):FITC)=1mg:150μg 的比例將FITC緩慢加入于抗體溶液中,邊加邊輕輕晃動(dòng)使其與抗體混合均勻,暗處4 ℃反應(yīng)8 hr。

          4:加入5mol/L的NH4Cl至終濃度50mmol/L, 4 ℃終止反應(yīng)2 hr。

          5:將交聯(lián)物在PBS中透析四次以上,至透析液清亮。

          6:交聯(lián)物的鑒定F/P比例:  ,該值應(yīng)介于2.5 ~ 6.5之間。

          7:FITC交聯(lián)的蛋白應(yīng)置于pH7.4的磷酸鹽緩沖液中,加入0.1% NaN3、1% BSA,4℃暗處保存。


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