多肽是如何分離和純化的?

　　由于合成方法成本高，產(chǎn)量低，發(fā)酵方法難以分離目標(biāo)活性肽。蛋白質(zhì)酶水解常用。然而，除肽外，其產(chǎn)物還含有一些未水解的蛋白質(zhì)。氨基酸。蛋白酶等。為了獲得目標(biāo)活性肽，還需要更深層次的分離和純化。

        目前，多肽分離和純化的主要方法有超濾、鹽分析、凝膠、離子交換分析、色譜法、電泳法等。這些方法是基于氨基酸和多肽。多肽與蛋白質(zhì)的分離和純化。根據(jù)不同的需要，幾種方法通常用于實際應(yīng)用。常用的分離和純化方法如下：

　　(1)超濾：

　　        超濾是根據(jù)超濾膜孔徑的大小分離處理樣品的分子量和形狀。超濾是膜分離法中最常用的分離和純化多肽的方法。在處理多肽樣品的過程中，酶解過程應(yīng)與超濾分離過程相連，并根據(jù)處理樣品的特點選擇合適的膜材料，以實現(xiàn)產(chǎn)品分子量的控制。超濾法在操作過程中需要消耗大量的水，因此后期的濃度會消耗時間，如果初始液體預(yù)處理不當(dāng)，會導(dǎo)致膜孔堵塞，影響膜的使用壽命，成本相對昂貴。

　　(2)鹽析:

　　        高濃度的中性鹽可以使溶液中的大分子物質(zhì)積累形成沉淀，這個過程是鹽分析。蛋白質(zhì)和肽的特征基團(tuán)，如NH2.-OH.-COOH，是親水基團(tuán)，可與水形成水化層，然后與蛋白質(zhì)分子形成親水膠體，降低蛋白質(zhì)分子之間的力，從而增加蛋白質(zhì)和肽的溶解度。在蛋白酶溶液中加入大量高濃度的中性鹽，中性鹽會帶走大量的水分子，破壞膜結(jié)構(gòu)，疏水基團(tuán)暴露，電荷中和，親水膠體破壞，然后蛋白質(zhì)和肽積累沉淀，獲得目標(biāo)肽。雖然鹽分析方法操作簡單。成本低，但在這個過程中不可避免地會增加肽的含量，影響肽的味道。

　　(3)納濾:

　　        納濾膜是一種分離性能介于反滲透膜和超濾膜之間的方法。納濾膜具有納米孔徑，截留分子量為100~1000D，而小分子多肽和氨基酸的相對分子量為100~1000D。它們都是性電解質(zhì)。分子中含有酸性基團(tuán)和堿性基團(tuán)。當(dāng)溶液的pH等于其等電點時，分子為電中性，凈電荷為零;當(dāng)pH偏離等電點時，分子成為帶正電荷或負(fù)電荷的離子，因此通過空間位阻和電荷效應(yīng)的共同作用，納濾膜可以分離溶液中的多肽和氨基酸。采用納濾技術(shù)分離純化多肽和氨基酸主要基于道南(Donnan)效應(yīng)和空間位阻效應(yīng)。納濾膜的分離選擇性由納濾膜兩種效應(yīng)共同決定，其中Donan效應(yīng)受溶液pH、離子強(qiáng)度和組成以及多肽的影響。氨基酸濃度和膜表面電性應(yīng)受到嚴(yán)格控制。目前，采用過濾分離技術(shù)對氨基酸和肽進(jìn)行分離純化的研究取得了許多成果。由于肽和氨基酸混合溶液的復(fù)雜性和膜制品的單一性，大部分還沒有進(jìn)入實際應(yīng)用，大部分都處于實驗室研究階段。

　　(4)凝膠過濾色譜:

　　        凝膠過濾色譜，又稱分子阻力色譜。分子篩分析等，凝膠過濾色譜法是以多孔凝膠填料為固定階段，利用多肽分子的大小。性質(zhì)差異達(dá)到分離純化的目的。凝膠過濾色譜的原理是根據(jù)分子的大小進(jìn)行分離。當(dāng)分離成分進(jìn)入分析柱時，大分子成分不能進(jìn)入凝膠顆粒，只能從凝膠顆粒的間隙中隨洗液流動，洗滌速度快;小分子成分可直接進(jìn)入凝膠顆粒，在凝膠顆粒與凝膠間隙之間隨洗液流動，洗滌速度慢。因此，根據(jù)分析柱內(nèi)的不同移動速度，大分子成分**被洗掉，小分子隨后被洗掉，以達(dá)到分離純化的目的。在蛋白質(zhì)、肽和氨基酸的分離和純化中，應(yīng)根據(jù)分子的大小確定具有足夠分離范圍的介質(zhì)，并選擇合適的凝膠顆粒。目前，凝膠過濾色譜法已被廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)的分離和純化。它分離方便。

　　(5)離子交換分析：

　　        離子交換層析是一種利用固定相與分離成分之間的離子交換來分離和純化物質(zhì)的方法。離子交換層析法可分為陽離子交換和陰離子交換。在進(jìn)行離子交換層析時，應(yīng)注意交換介質(zhì)的選擇。緩沖系統(tǒng)的選擇。溶液制備等多種影響因素。目前，離子交換層析法具有重復(fù)性好、操作簡單、洗滌范圍廣等優(yōu)點，更適合工業(yè)生產(chǎn)。

　　(6)**液相色譜分析方法:

　　        與其他分離方法相比，**液相色譜分析方法具有更高的準(zhǔn)確性和優(yōu)越性。在分離純化蛋白質(zhì)和肽的過程中，**液相色譜分析方法最常用的是反相**液相色譜。其分離原理是根據(jù)固定液體中待分離的組分的不同分離性能，該方法適用于分離純化分子量小于5000D的組分，特別是分子量小于1000D的小分子肽。**液相色譜分析方法具有分離純化肽的良好效果。檢測靈敏度高。分離純化速度快，更適合分離純化高純度肽產(chǎn)品。