熒光染料的一個(gè)基本原理是在熒光劑的幫助下對(duì)細(xì)胞成分進(jìn)行高度特異性的可視化。
西安pg電子官方生物提供酶HRP,熒光FITC,Biotin、Cy3、Cy5、Cy7、羅丹明等熒光物質(zhì)標(biāo)記蛋白,標(biāo)記位置是氨基,標(biāo)記的蛋白有:牛血紅蛋白、膠原蛋白、鏈霉親和素、大鼠免疫球蛋白、牛胎球蛋白、人轉(zhuǎn)鐵蛋白、胰島素、重組蛋白G等幾十種蛋白,提供檢測(cè)圖譜。
它可以是一種熒光蛋白,例如GFP與基因上感興趣的蛋白質(zhì)有關(guān)。如果克隆是不可能的,比如在組織樣本中使用免疫熒光染色等技術(shù)來可視化感興趣的蛋白質(zhì)。因此,使用與不同熒光染料連接并直接或間接與適當(dāng)目標(biāo)結(jié)構(gòu)結(jié)合的抗體。借助熒光染料,熒光顯微鏡不僅限于蛋白質(zhì),還可用于檢測(cè)核酸、聚糖等結(jié)構(gòu)。你甚至可以使用特定應(yīng)用的各種活細(xì)胞染料,允許細(xì)胞器選擇性染色(如ER、線粒體、高爾基體)或功能測(cè)定。例如,熒光是活細(xì)胞跟蹤、標(biāo)記、細(xì)胞增殖或活死細(xì)胞測(cè)定的讀取方式。甚至可以檢測(cè)到鈣離子和其他非生物質(zhì)。
在熒光顯示過程中,有兩種方法可以顯示你感興趣的蛋白質(zhì)。熒光標(biāo)記抗體要么借助內(nèi)部熒光信號(hào)將熒光蛋白與靶蛋白基因連接,要么借助結(jié)合目標(biāo)蛋白特異性的熒光標(biāo)記抗體。對(duì)于一些生物學(xué)問題,執(zhí)行后的問題更有用甚至必要。例如,在組織樣本的情況下,不可能使用熒光蛋白,因?yàn)闃颖就ǔ碜圆缓瑹晒獾鞍椎纳矬w。熒光蛋白的另一個(gè)缺點(diǎn)是它們本身就是蛋白質(zhì)的性質(zhì)。有了它,它們?cè)诩?xì)胞中具有特定的蛋白質(zhì)特征,這可能導(dǎo)致功能障礙或?qū)Ω街母信d趣蛋白質(zhì)的誤解。然而,應(yīng)考慮使用熒光蛋白通常是研究活細(xì)胞的**。
免疫熒光利用抗體對(duì)抗原的特異性結(jié)合親和力。這可以有兩種不同的外觀。最簡(jiǎn)單的方法是使用熒光標(biāo)記抗體與感興趣的蛋白質(zhì)結(jié)合。這被稱為直接免疫熒光。
在大多數(shù)情況下,使用兩種形式的抗體。**種與目標(biāo)蛋白結(jié)合,本身沒有熒光標(biāo)記(一種抗體)。但**種抗體(二種抗體)與一種抗結(jié)核特異性地?cái)y帶熒光染料。這種方法被稱為間接免疫熒光,有幾個(gè)優(yōu)點(diǎn)。一方面,有放大作用,因?yàn)椴恢挂环N二抗體和一種一抗結(jié)核體。另一方面,通常比普通熒光染料標(biāo)記的特異性一抗體更容易找到二抗體。
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