西安pg電子官方生物**供應(yīng)一系列的凝集素;同時(shí)提供各種熒光標(biāo)記修飾偶聯(lián)的凝集素。提供羅丹明、CY3、CY5、FITC、生物素Biotin、瓊脂糖Agarose、DyLight 488、DyLight 594、DyLight 649、Texas Red標(biāo)記各種凝集素。
凝集素(Lectin)是指一種從各種植物,無脊椎動(dòng)物和高等動(dòng)物中提純的糖蛋白或結(jié)合糖的蛋白,因其能凝集紅血球(含血型物質(zhì)),故名凝集素。常用的為植物凝集素(Phytoagglutin,PNA),通常以其被提取的植物命名,如刀豆素A(Conconvalina,ConA)、麥胚素(Wheat germ agglutinin,WGA)、花生凝集素(Peanut agglutinin,PNA)和大豆凝集素(Soybean agglutinin,SBA)等,凝集素是它們的總稱。凝集素可以作為一種探針來研究細(xì)胞膜上特定的糖基。另一方面,凝集素具有多價(jià)結(jié)合能力,能與FITC熒光素、生物素、酶、膠體金和鐵蛋白等示蹤物結(jié)合,從而在光鏡與/或電鏡水平顯示其結(jié)合部位。通常采用熒光素、辣根過氧化物酶、鐵蛋白、膠體金、Cyanine或生物素等對(duì)其進(jìn)行標(biāo)記。
FITC標(biāo)記凝集素的組織化學(xué)染色程序
1.組織切片經(jīng)脫蠟處理,若是Bouin液固定的組織,用70%乙醇洗3次除去組織切片內(nèi)的黃色后,再用蒸餾水漂洗;
2.PBS漂洗(含1%牛血清白蛋白)2次,每次5分鐘;
3.加入FITC-凝集素(PBS適當(dāng)*釋),置濕盒內(nèi)孵育,室溫1小時(shí);
4.PBS漂洗3次,每次5分鐘;
5.水溶性封片劑封片,熒光顯微鏡觀察。
6.結(jié)果 FITC標(biāo)記的凝集素能直接與組織細(xì)胞內(nèi)的糖基結(jié)合,從而顯示糖基的位置,可用于檢測組織細(xì)胞中的糖成分,陽性部位呈黃綠色熒光。
注意事項(xiàng)
(1)固定液:以Bouin固定液為佳,也可用70%乙醇固定;
(2)與其他組織化學(xué)方法一樣,染色過程中,應(yīng)始終保持一定濕度,使切片保持濕潤狀態(tài);
(3)需經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定FITC-凝集素的*佳工作濃度;
(4)凝集素的活性部位需重金屬離子維持,故可用TBS作為緩沖液,加微量的金屬(CaCl2、MgCl2、MnCl2各1.0mmol/L),可增強(qiáng)凝集素的結(jié)合能力。
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