半抗原藥物偶聯(lián)載體蛋白的多種方法綜述！

西安pg電子官方生物提供將小分子物質(zhì)（如藥物、半抗原等）或大分子物質(zhì)（如酶、蛋白毒素）等一共價(jià)鍵的方式連接于蛋白分子（（OVA、BSA、HSA），以制備人工抗原酶標(biāo)抗體等。

小分子半抗原藥物與載體蛋白偶聯(lián)效果會(huì)受到偶聯(lián)物的濃度及其相對(duì)比例、偶聯(lián)劑的藥物濃度及其相對(duì)量、緩沖液成分及其純度和離子強(qiáng)度、pH以及半抗原的穩(wěn)定性、可溶性和理化特性等因素的影響。通常是在條件溫和的水溶液中將半抗原與載體蛋白共價(jià)結(jié)合，不宜在高溫、低溫、強(qiáng)堿、強(qiáng)酸條件下進(jìn)行，一般是由半抗原上的活性基團(tuán)決定偶聯(lián)合成的方法。

簡要介紹下半抗原與載體偶聯(lián)方法：

1，帶羧基或者氨基類的化合物，用碳化二亞胺法以及混合酸酐法；

2，含巰基類的化合物，用馬來酰亞胺法；

3，分子結(jié)構(gòu)中帶有氨基類的化合物，戊二醛法，是常用的一種方法。

常用的方法如下:

1.分子中含有羧基或者可羧化的半抗原的偶聯(lián)

1)混合酸酐法(也稱氯甲酸異丁酯法)。

半抗原上的羧基在正丁胺存在下與氯甲酸異丁酯反應(yīng)，形成混合酸酐的中間體，再與蛋白質(zhì)的氨基反應(yīng)，形成半抗原與蛋白質(zhì)的結(jié)合物

2)碳二亞胺法(CDI):

碳二亞胺(EDC)使羥基和氨基間脫水形成酰胺鍵，半抗原上的羧基先與EDC反應(yīng)生成一個(gè)中間物，然后再與蛋白質(zhì)上的氨基反應(yīng)，形成半抗原與蛋白質(zhì)的結(jié)合物。 如果半抗原分子中不含羧基，可通過某些化學(xué)反應(yīng)引入羧基。在引入羧基后，也可用上述方法進(jìn)行偶聯(lián)。

2.含有氨基或可還原硝基半抗原的偶聯(lián)

1 )戊二醛法:

雙功能試劑戊二醛的兩個(gè)醛基分別與半抗原和蛋白質(zhì)上的氨基形成schif 鍵(N=C<,在半抗原和蛋白質(zhì)間引入一個(gè)5碳橋。這一反應(yīng)條件溫和，可在4~40°C及pH6.0~8.0內(nèi)進(jìn)行，操作亦簡便，因此應(yīng)用廣泛。戊二醛受到光照、溫度和堿性的影響，可能發(fā)生自我聚合，減弱其交聯(lián)作用，因此經(jīng)常使用新鮮的戊二醛。

2)重氮化法:

用于活性基團(tuán)是芳香胺基的半抗原，芳香胺基與NaNO2和HCl反應(yīng)得到一個(gè)重氮鹽，它可直接接到蛋白質(zhì)酪氨酸羧基的鄰位上，形成一個(gè)偶氮化合物。

3. 含羥基半抗原的偶聯(lián)

)琥珀酸酐法:

半抗原的羥基與琥珀酸酐在無水吡啶中反應(yīng)得到一個(gè)琥珀酸半酯(帶有羧基的中間體)，再經(jīng)碳二亞胺法或混合酸酐法與蛋白質(zhì)氨基結(jié)合，在半抗原與蛋白質(zhì)載體間插入一個(gè)琥珀�；�。

2)羰基二咪唑法: N，N'-羰基二咪唑是引入羰基的高活性試劑，在肽合成中表明了是形成**的酰胺鍵試劑。

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