FITC,英文全稱Fluorescein Isothiocyanate,中文名稱異硫氰酸熒光素,具有高吸收率、優(yōu)良的熒光量子產(chǎn)率和良好的水溶性等特點(diǎn),是生物學(xué)中應(yīng)用廣泛的一種綠色熒光素衍生物
FITC為黃-橙色粉末,激發(fā)波長為494 nm。一旦激發(fā),在發(fā)射波長520 nm處呈黃-綠色熒光。
牛奶蛋白又稱牛乳蛋白,是 牛奶 中很多種 蛋白質(zhì) 混合物總稱。. 主要由 酪蛋白 (casein)和 乳清蛋白 (lactoal-bumin)兩大部分組成。. 前者為牛奶在20℃,PH值4.6條件下沉淀下來的蛋白質(zhì),余下溶解于 乳清 的蛋白質(zhì)均稱為乳清蛋白。. 乳清蛋白則包括 β-乳球蛋白 、α-乳白蛋白、 血清白蛋白 和 免疫球蛋白 及其他微量蛋白,如含 銅 、 鋅 - 超氧化物歧化酶 等。
提供一種 FITC標(biāo)記蛋白的使用方法
1.制備溶于0.1M碳酸鈉緩沖液( pH 9.0 )的待標(biāo)記蛋白溶液,濃度≥2mg/ml.
2 )溶解FITC于無水DMSO配制成1mg/ml的溶液。
3 )對(duì)于1ml蛋白溶液加入50μFITC溶液,可按照每次5μ的量邊加邊輕輕攪拌蛋白溶液;
4 )待所需FITC加入完畢,將反應(yīng)液于4°C避光孵育8h ;
5 )加入NH4CI使其終濃度至50mM , 4°C終止反應(yīng)2h ;
6)加入二甲苯青至濃度0.1% ,甘油至濃度5% ;
7 )通過大小孔徑合適的凝膠過濾層析分離排除未被結(jié)合的FITC ,分離范圍在20,000至50,000 (球蛋白例如抗體)。待凝膠柱平衡后,將以上反應(yīng)混合波從柱頂注入,
打開凝膠柱,待其全部流入柱床后,加入PBS緩沖液。
此時(shí),可以形成兩條帶: a,快速移動(dòng)帶,也就是FITC-蛋白標(biāo)記物,先被洗脫,通常于室內(nèi)光下可看到; b,慢速移動(dòng)帶,也就是未結(jié)合蛋白的FITC和二=甲苯青。僅僅在PBS緩沖液清洗后被洗脫出來。
8 )于4°C避光儲(chǔ)存上述偶聯(lián)物,加入0.1% ( w/v )疊氮化鈉作為-種防腐劑。若蛋白濃度較低( < 1mg/ml) , 可加入1%BSA作為-種蛋白穩(wěn)定劑。
9)標(biāo)記物中熒光素和蛋白的比值( F/P )可通過測定495nm和280nm處的吸光值來鑒定, F/P應(yīng)位于0.3-1.0。小于該比例則信號(hào)太低,高于該比例則背景太高。
1:可以提供一些熒光標(biāo)記的蛋白,
如FITC/Rhodamine/Cy3/Cy3.5/Cy5/Cy5.5/Cy7/Cy7.5/ICG
2:還可以提供一些活化基團(tuán)的蛋白產(chǎn)品如:
Amine/Thiol/Azide/Maleimide/Alkyne/NHS/COOH等基團(tuán)
3:還可以提供一些小分子或蛋白偶連的蛋白產(chǎn)品如:
Biotin/Folic acid/cRGD/DBCO/DOTA/Cyclodextrin/Galactose/Streptavidin/BSA/HAS/Concanavalin A等等
相關(guān)產(chǎn)品:
FITC熒光標(biāo)記乳蛋白
FITC熒光標(biāo)記黏液蛋白
FITC熒光標(biāo)記仿生鐵蛋白
FITC熒光標(biāo)記融合蛋白tTF-EG3287
FITC熒光標(biāo)記重組蝎氯毒素gCTX融合蛋白
FITC熒光標(biāo)記融合蛋白
FITC熒光標(biāo)記NGR-VEGI
FITC熒光標(biāo)記血小板糖蛋白
CY3熒光素標(biāo)記甘露糖 6-磷酸-人血清白蛋白(M6P-HSA)
FITC熒光標(biāo)記熱休克蛋白HSP27
FITC熒光標(biāo)記硒結(jié)合蛋白 FITC熒光標(biāo)記 SBPFITC熒光標(biāo)記
FITC熒光標(biāo)記鋅指蛋白FITC熒光標(biāo)記60
FITC熒光標(biāo)記微管蛋白α6 α-tubulin
用途:科研
狀態(tài):固體/粉末/溶液
產(chǎn)地:西安
儲(chǔ)存時(shí)間:1年
保存:冷藏
廠家:西安pg電子官方生物科技有限公司