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          蛋白質(zhì)交聯(lián)劑的使用方法和應(yīng)用方向(轉(zhuǎn))
          發(fā)布時間:2020-11-02     作者:wyf   分享到:

          蛋白質(zhì)交聯(lián)劑的使用方法和應(yīng)用方向(轉(zhuǎn))


          蛋白質(zhì)交聯(lián)劑分為三大類:同源交聯(lián)劑,異源交聯(lián)劑,光反應(yīng)交聯(lián)劑。

          使用方法

          圖示為同源交聯(lián)劑的使用方法:將待交聯(lián)的蛋白質(zhì)A與交聯(lián)劑在一定條件下反應(yīng),得到的蛋白質(zhì)A-交聯(lián)劑中間體,然后移除多余的交聯(lián)劑,再加入欲交聯(lián)的蛋白質(zhì)B。產(chǎn)物中可能會形成多聚體,這一副產(chǎn)物通過調(diào)節(jié)反應(yīng)條件來控制。分成兩部反應(yīng)的目的在于減少分子內(nèi)交聯(lián)以及形成蛋白質(zhì)多聚物。另外,選擇異源交聯(lián)劑也可以減少多聚物的產(chǎn)生。

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          應(yīng)用

          蛋白質(zhì)交聯(lián)劑已有廣泛應(yīng)用于生命科學研究的各個分支。

          蛋白質(zhì)間相互作用研究

          大多數(shù)蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)結(jié)合相互作用是瞬時的,通過交聯(lián)方法可以穩(wěn)定或永久連接相互作用復合物中的成分,從而有助于鑒別這些瞬時接觸。一旦相互作用的成分被共價偶聯(lián),可以使用其他步驟(例如細胞裂解,親和純化和電泳)來制備分析樣品,同時可維持的相互作用復合物。

          生物導彈研究(靶向**)

          將能識別**表面抗原的抗體與**共價連接,實現(xiàn)靶向**,從而減少傳統(tǒng)化療方法對健康細胞的殺傷。

          載體蛋白與半抗原的連接

          半抗原只有反應(yīng)原性而沒有免疫原性。而將病毒包被蛋白的一段多肽序列(半抗原)可以和載體蛋白連接后制成疫苗,激發(fā)免疫反應(yīng)。另外也可以通過這種方法制備單克隆抗體,并利用此單抗返回找到大分子蛋白上的抗原結(jié)合位點。在連接二者的操作中,較低的半抗原-載體蛋白摩爾比會帶來更高的抗體親和力。

          此外將半抗原連接在載體蛋白中間的氨基酸上比連接在其末端時產(chǎn)生的的抗體效價更高。

          蛋白質(zhì)或其他分子的固相化

          將蛋白質(zhì)通過共價鍵結(jié)合在磁珠,96孔板,玻璃等等固體基質(zhì)上,以減少洗脫過程中的損失。

          抗體的標記、標記轉(zhuǎn)移

          將抗體與酶,熒光基團或者生物素連接用于定量測量或者定位觀察?贵w標記與修飾之前,需要用固定化的抗原純化。為了避免抗體結(jié)合抗原的位點被封閉,選擇抗體重鏈上合適位置的的氨基酸就比較重要。標記酶可以連接在抗體鉸鏈區(qū)打開形成的二硫鍵上,或者或者抗體的非特異性片段上。

          此外,還可以將抗體酶切,獲得抗原結(jié)合片段,然后將標記基團與抗原結(jié)合片段連接。這種方法的優(yōu)勢是在ELISA反應(yīng)中減少了Fc片段的干擾,并且也增加了這一復合物的膜通透性,使之更適合標記活體細胞。左圖是將標記基團結(jié)合在鉸鏈區(qū)二硫鍵打開生成的巰基上。右圖是將標記基團直接結(jié)合在抗體結(jié)合片段上。

          交聯(lián)是指將兩個或多個分子通過共價鍵化學結(jié)合的過程。 交聯(lián)劑包含具有反應(yīng)活性的末端,可與位于蛋白或其他分子上的特定功能基團,如伯胺和巰基反應(yīng)。 蛋白和多肽上有多個化學基團可用于交聯(lián),因此蛋白和多肽可以作為偶聯(lián)的靶標,用于使用交聯(lián)方法的研究中。

          交聯(lián)劑用于確定鄰近蛋白間的關(guān)系以及配體-受體相互作用。 具有氨基反應(yīng)活性的同型雙功能的交聯(lián)劑:琥珀酰亞氨酯或亞氨酸酯、以及具有氨基反應(yīng)活性和光活化疊氮苯化合物的異型雙功能交聯(lián)劑是這些應(yīng)用中常用的交聯(lián)劑。

           

          交聯(lián)劑也常用于修飾核酸、**和固相載體表面。 用于氨基酸和核酸表面修飾和標記的化學原理是相同的。 該化學領(lǐng)域稱為生物偶聯(lián),包括交聯(lián)、固定、表面修飾和生物分子標記。


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