分離純化-單克隆抗體的七個(gè)步驟(含抗體標(biāo)記定制產(chǎn)品)

　　一般的單克隆抗體的純化工藝中主要是采用色譜分離技術(shù)的，這個(gè)技術(shù)也就是常說的層析分離法(Chromatography)。通過層析分離后的收獲液，再加上輔料，就變成了常說的原液了。一般的說，層析分離主要是指親和層析(AC)、陽離子交換層析(CEX)和陰離子交換層析(AEX)。

　　分離純化步驟

　　一、親和層析:免疫吸附,捕獲目的蛋白

　　分離純化中主要的幾個(gè)步驟是層析分離，分離純化其實(shí)就是載量比較大的液相色譜是個(gè)用于生物制品的制備液相。通常的，會把親和層析叫做粗純，將陽離子交換層析和陰離子交換層析叫做精純，下面我們先看看親和層析。親和層析的原理，就是依靠填料對單克隆抗體的特異性吸附，捕獲單抗。大概就是下面圖里(圖1)這個(gè)原理：

　　二、低pH值孵育:殺滅病原體

　　這是個(gè)排在親和層析之后，陽離子交換層析之前的步驟。主要的目的是要去除病毒和其他一些病原體。

　　三、陽離子交換層析:離子交換，純化目的蛋白

　　低pH值孵育處理后，就要開始陽離子交換了。親和層析獲得的洗脫液，只是初步純化的產(chǎn)物，陽離子交換后，很多雜蛋白就被去掉了，尤其是親和層析時(shí)從填料上脫落一些Protein A蛋白，在這一步也能被很好的去除。陽離子交換的原理，簡單地說就是用帶正電的單抗替換掉填料上的陽離子，其他的雜蛋白和雜質(zhì)都隨穿透液流走了，再用更強(qiáng)離子強(qiáng)度的離子從填料上替換掉單抗，收獲液中就可以得到更純的單抗了。基本上就是下圖這個(gè)原理(圖2)：

　　四、陰離子交換層析:離子交換，去除雜質(zhì)

　　經(jīng)過陽離子交換，雜蛋白基本去除了，剩下的一些DNA、內(nèi)毒素和其他雜質(zhì)，可以用陰離子交換的方式去掉。陰離子交換的原理也是同種電荷替換，與陽離子交換原理接近(如圖)

　　五、納濾:過濾去除病毒

　　陰離子交換后，就要進(jìn)行納濾除病毒，大概原理就是(下圖)這個(gè)原理，基本可以理解為是個(gè)孔徑很小的，小到可以濾掉病毒的過濾：

　　六、超濾濃縮和洗濾置換

　　1.超濾濃縮:濃縮蛋白至特定濃度

　　2.洗濾置換:置換蛋白緩沖液至特定緩沖體系

　　納濾后的液體需要再經(jīng)過UF/DF處理，這里面要分成兩個(gè)步驟：一是UF，也就是超濾濃縮，因?yàn)榻?jīng)過陰離子交換和納濾之后，收獲液被大大的稀釋了，目的蛋白的濃度已經(jīng)不適合用于制劑灌裝了，需要通過超濾的方式進(jìn)行濃縮，達(dá)到適合灌裝的濃度;二是DF，也就是洗濾置換，也就是要把含有蛋白的緩沖液體系，從經(jīng)過一系列純化和過濾后，已經(jīng)變的亂七八糟的組分換成可以配制成原液的組分。

　　無論是UF還是DF，基本原理都是切向流，大概的原理見下圖

　　七、原液配制:加入輔料，形成原液

　　經(jīng)過以上一些列操作，雜質(zhì)和病原體被去除了，蛋白質(zhì)濃度也適宜了，緩沖體系也符合要求了，再加上輔料，就可以成為能用于灌裝的原液了。

　　總而言之，分離純化的目的就是把經(jīng)過細(xì)胞培養(yǎng)而得到的，組分復(fù)雜的發(fā)酵收獲液，經(jīng)過一系列層析分離、過濾、超濾、洗濾、添加輔料等處理，使之成為能夠用于制劑生產(chǎn)的原液。

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　　產(chǎn)品：

　　辣根過氧化物酶標(biāo)記小鼠腹水單克隆抗體

　　辣根過氧化物酶標(biāo)記不同表型鼠疫F1單克隆抗體

　　辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記抗bFSH單克隆抗體

　　辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記抗bLH單克隆抗體

　　辣根過氧化拖把酶(HRP)標(biāo)記抗宮頸**單克隆抗體AU14-1

　　辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記羊抗鼠IgG(簡稱酶標(biāo)二抗)

　　辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記單克隆抗體1F8

　　辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記抗AFP鼠單克隆抗體

　　辣根過氧化物酶標(biāo)記磷酸酪氨酸特異性單克隆抗體(HRP-PY20)

　　抗SjP38單克隆抗體標(biāo)記辣根過氧化物酶(HRP)

　　辣根過氧化物酶標(biāo)記JWA抗體(HRP-JWA(7C3))

　　辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記抗宮頸**單克隆抗體AU(14-1)

　　辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記BoHp單克隆抗體

　　辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記AFB1單克隆抗體

　　辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記抗-HBe單克隆抗體(MAb)

　　辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記抗HCG單克隆抗體

　　生物素標(biāo)記鼠抗人CD35單克隆抗體

　　生物素標(biāo)記人BAFF多克隆抗體

　　生物素標(biāo)記抗人Adipsin單克隆抗體

　　生物素標(biāo)記抗cTnI單克隆抗體

　　生物素化抗E.coli O157:H7單克隆抗體

　　生物素標(biāo)記鼠抗人IgA單克隆抗體

　　生物素化抗人胰島素(hIns)單克隆抗體

　　生物素標(biāo)記小鼠抗人IgE單克隆抗體

　　生物素標(biāo)記布魯菌多克隆抗體

　　生物素標(biāo)記兔抗牛種布魯菌544A多克隆抗體

　　生物素標(biāo)記兔抗羅非魚IgM多克隆抗體

　　生物素標(biāo)記孕酮多克隆抗體

　　生物素標(biāo)記多克隆抗GST抗體

　　生物素標(biāo)記肌紅蛋白單克隆抗體

　　生物素標(biāo)記D?二聚體多克隆抗體

　　異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記鼠抗人單克隆抗體

　　異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記單克隆抗體(McAb1-FITC)

　　異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記黃曲霉毒素B1單克隆抗體

　　異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記AFB1抗體

　　異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記淫羊藿苷單克隆抗體

　　異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記CEA單克隆抗體

　　異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記CD16,CD3,HLA-DR單克隆抗體

　　異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記CA50單克隆抗體

　　硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記萊克多巴胺單克隆抗體(RAC McAb)

　　硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記兩株抗-LH單克隆抗體

　　異硫氰酸(FITC)熒光素標(biāo)記抗RABVN蛋白單克隆抗體

　　異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記TSH單克隆抗體

　　異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記抗ZEA單克隆抗體

　　異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記抗GST單克隆抗體

　　異硫氰酸熒光素標(biāo)記鼠抗人新單抗288a-FITC

　　異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記鼠抗Ⅷ因子抗原單克隆抗體

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　　異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記AFP單克隆抗體

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