目前市場上基于酶底物檢測方法主要是顯色培養(yǎng)基法和熒光檢測法。本文合成了一種新型半乳糖酶底物1，可以通過與氣相色譜聯(lián)用技術(shù)來快速檢測病源微生物。酶底物1的合成路線如圖1所示,以五乙酰半乳糖2為原料,經(jīng)溴代,親核取代、還原和脫保護(hù)等5步有機(jī)反應(yīng)，總產(chǎn)率為56.1% ,高產(chǎn)率高選擇性得到目標(biāo)酶底物。

圖1酶底物1合成路線。

實(shí)驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)步驟

步驟一：1-溴-2,3,4,6-O-四乙�；�-3-D-半乳糖2的合成

步驟二：2,3,4,6-O-四乙�；�-1-O-(4-甲�；�苯氧基)-3-D-半乳糖3的合成

步驟三：2,3,4,6-O-四乙酰基-1-O-(4-羥甲基苯氧基)-B-D-半乳糖4的合成

步驟四：半乳糖綴合物5的合成

步驟五：半乳糖苷酶底物1的合成

結(jié)果與討論

該酶底物1可被微生物分泌的半乳糖酶水解，發(fā)生斷裂糖苷鍵釋放出苷元a。苷元a化學(xué)性質(zhì)非常不穩(wěn)定,在緩沖液中會自發(fā)斷裂釋放出一分子二甲胺、二氧化碳和4-羥甲基苯酚,其水解原理如圖2所示。二甲胺在室溫為帶有氨味的氣體,通過與氣體檢測儀如氣相色譜聯(lián)用可以靈敏監(jiān)測酶底物的水解動態(tài),從而可以進(jìn)一步發(fā)展為微生物檢測技術(shù)。

在合成過程中,對化合物4的合成方法進(jìn)行了優(yōu)化,發(fā)現(xiàn)采用LiAIH副產(chǎn)物較多,KBH存在反應(yīng)不完全現(xiàn)象，只有NaBH4和THF體系反應(yīng)效果更好�；�合物5的合成過程中,曾采用固體三光氣做為偶聯(lián)活化試劑,將二甲胺和化合物4偶聯(lián),發(fā)現(xiàn)反應(yīng)控制較難，會有大量副產(chǎn)物生產(chǎn)，產(chǎn)率只有28%。故改用二甲氨基甲酰氯為反應(yīng)試劑,產(chǎn)率大幅度提升,產(chǎn)率高達(dá)82%�？傊�,本文報(bào)道了一種新型半乳糖糖苷酶底物的合成方法,采用價(jià)廉易得的五乙酰半乳糖為起始原料,通過五步有機(jī)合成反應(yīng)得到目標(biāo)產(chǎn)物,總產(chǎn)率高達(dá)56.1%。合成方法具有操作簡便,產(chǎn)率高和選擇性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn),并對半乳糖苷酶底物1的水解機(jī)理進(jìn)行了探討,其相關(guān)生物檢測部分將有待進(jìn)一步研究。

圖2 半乳糖苷酶底物的水解。

西安pg電子官方生物科技有限公司是一家集化學(xué)、生物和材料科學(xué)等領(lǐng)域的科研用研發(fā)產(chǎn)品的制造貿(mào)易商，我們的產(chǎn)品在基礎(chǔ)科學(xué)領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用。客戶包括大專院�？蒲性核�的研究開發(fā)實(shí)驗(yàn)室、生物技術(shù)等具商業(yè)規(guī)模的企業(yè)。目前我們能提供超過幾千種產(chǎn)品的庫存，包裝大小從克級到公斤級大包裝規(guī)格，也包括部分半散裝和散裝產(chǎn)品，我們的庫存品種每天都在增加。

以下為部分產(chǎn)品列表

Ac-IETD-R110

Ac-DEVD-AMC

2',7'-二氯熒光素二乙酸酯

Dihydrorhodamine 123, dihydrochloride salt

二氫若丹明123

二氫乙錠

CF640R Tyramide

CF594 Tyramide

CF568 Tyramide

CF543 Tyramide

CF488A Tyramide

CF350 Tyramide

Biotin-XX Tyramide

2,2'-聯(lián)氮雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二銨鹽

10-Acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine

氯化硝基四氮唑蘭

4-甲基傘形酮磷酸二鈉鹽三水

MUP, free acid

1, 6-二磷酸果糖鈉

Chromogenic Phosphatase Substrate Sampler

5-溴-4-氯-3-吲哚基磷酸酯對甲苯胺鹽

BCIP Red

BCIP Pink

XTT 鈉鹽

Resorufin (high purity)

Resazurin, Sodium Salt

噻唑藍(lán)

2,3-二(4-甲基苯基)-1H-四唑-3-鎓-5-甲腈氯化物

5-溴-4-氯-3-吲哚-Β-D-纖維二糖糖苷

zl 02.03