傳統(tǒng)的抗**方法具有很強(qiáng)的毒副作用，新型的**預(yù)防**癥方式是通過誘導(dǎo)宿主免疫反應(yīng)特異性清除**細(xì)胞。一方面，通過體液免疫產(chǎn)生的大量抗體可以中和**細(xì)胞，從而在**癥預(yù)防中發(fā)揮重要作用。另一方面，細(xì)胞免疫誘導(dǎo)產(chǎn)生的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL）具有直接裂解**細(xì)胞的能力，這是**的**性**癥疫苗的必要條件。但是**性**癥疫苗往往難以達(dá)到理想療效，因?yàn)槊庖呦到y(tǒng)已經(jīng)對(duì)利用自身抗原偽裝的**細(xì)胞產(chǎn)生了耐受。針對(duì)這個(gè)問題，有課題組開發(fā)了一種新的**衍生磁小體作為一種高性能的**癥疫苗。該磁小體以尺寸均勻，具有高超順磁性和磁化強(qiáng)度的Fe3O4磁性納米團(tuán)簇(MNCs)作為核心，然后Toll樣受體激動(dòng)劑CPG-ODN(C)通過靜電相互作用吸附于該磁性納米團(tuán)簇表面形成C-MNCs，然后利用提取的疊氮化修飾過的**細(xì)胞膜(M)包裹吸附Toll樣受體激動(dòng)劑的磁性納米團(tuán)簇形成M/C-MNCs，二苯并環(huán)辛炔修飾的抗CD205(A)對(duì)磁小體表面的**細(xì)胞膜進(jìn)行進(jìn)一步修飾，合成了一種高性能的**癥疫苗A/M/C-MNC。該磁小體的高磁化強(qiáng)度有利于對(duì)其進(jìn)行磁控制，延長其在淋巴結(jié)的停留時(shí)間，同時(shí)其高超順磁性有利于核磁成像(MRI),以便實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)其在淋巴結(jié)的動(dòng)態(tài)分布。同時(shí)這種高性能的磁小體疫苗A/M/C-MNC可能會(huì)優(yōu)先被CD8+樹突狀細(xì)胞識(shí)別，這些CD8+樹突狀細(xì)胞具有MHCI交叉呈遞和激活CD8+T細(xì)胞的能力，因此大量的T細(xì)胞以很大的克隆多樣性和細(xì)胞毒性進(jìn)行增殖，即引起機(jī)體強(qiáng)烈的細(xì)胞免疫反應(yīng)，進(jìn)行**癥的免疫**。

構(gòu)建的A/M/C-MNC**癥疫苗在五個(gè)不同的**模型上系統(tǒng)地證明了**的預(yù)防和**作用，并且?guī)缀鯖]有異常，可以滿足臨床的各種要求。

1、為了驗(yàn)證其在體內(nèi)的應(yīng)用過程，對(duì)構(gòu)建所得的A/M/C-MNC進(jìn)行了系統(tǒng)表征，如圖1所示：

圖1D、E分別表示MNC，CpG-ODN，膜和抗CD205彼此完全共定位，粒徑逐漸增大，表明這四個(gè)組件已成功組裝，圖1F表明存儲(chǔ)了兩周的A/M/C-MNC的大小和ζ電位沒有明顯變化，表明了其具有良好的穩(wěn)定性。

2、對(duì)組裝成功的磁小體在淋巴結(jié)停留的時(shí)間進(jìn)行了研究

通過Dir標(biāo)記膜成分，來研究磁小體在淋巴結(jié)停留的時(shí)間，圖2顯示在施加一個(gè)磁場(chǎng)(m)后，淋巴結(jié)中的熒光信號(hào)得到一個(gè)明顯的改善，與MF相比A/M/C-MNC(m)可以保留更長的的時(shí)間，達(dá)到3周以上，且保留半衰期延長了5.99倍（圖2C），并且面積曲線下的曲線也顯示增加了48.1倍（圖2D），通過器官切除、核磁成像(MRI)等多種手段證明了磁控制延長了其在淋巴結(jié)的停留時(shí)間。后續(xù)實(shí)驗(yàn)都將連續(xù)施加21天的磁場(chǎng)控制。

圖2H、I、J證明了A/M/C-MNC具有良好的CD8+DC靶向性，通過磁控制，A/M/C-MNC(m)組中CD8+ DC的磁小體吸收量高。

3、評(píng)估淋巴結(jié)中T細(xì)胞的增殖與激活

淋巴結(jié)生長遵循與MHC表達(dá)相同的順序，通過PBS，MF，M/MNC，M/C-MNC，A/M/C-MNC和A/M/C-MNC(m)組別淋巴結(jié)的重量間接反映出T細(xì)胞的激活與增殖，與PBS組相比，A/M/C-MNC(m)組淋巴結(jié)的重量增加了約12.5倍，同時(shí)高通量測(cè)序表明增殖的T細(xì)胞顯示出很大的克隆多樣性，具體檢測(cè)結(jié)果見圖3，這種多抗原反應(yīng)可以克服**進(jìn)化過程中免疫逃逸的局限性。

4、活體抑瘤實(shí)驗(yàn)

通過磁控制，A/M/C-MNC(m)組的淋巴結(jié)停留時(shí)間顯著延長。觀察到，在第5天強(qiáng)勁擴(kuò)張和在淋巴結(jié)中的持續(xù)時(shí)間延長致4周(圖3F)，這可以進(jìn)一步增強(qiáng)針對(duì)**癥的**效果，和預(yù)計(jì)結(jié)果一樣，**生長率以PBS，MF，M/MNC，M/C-MNC，A/M/C-MNC和A/M/C-MNC(m)的順序降低, A/M/C-MNC(m)組的小鼠生存期**延長，在與抗PD-1(ap)聯(lián)合**中，小鼠甚至在80天后仍然存活,如圖4所示。

5、A/M/C-MNC(m)疫苗記憶效應(yīng)的探索

通過建立**轉(zhuǎn)移模型來研究不同磁小體制劑對(duì)**轉(zhuǎn)移的**作用，(A/M/C-MNC(m))組別與PBS組相比在組織學(xué)上未觀察到轉(zhuǎn)移灶，表明肺轉(zhuǎn)移得到了完全**（圖5D）。然后，添加抗PD-1(ap)的((A/M/C-MNC(m)+aP)可使小鼠在80天后達(dá)到100％的存活率。通過**復(fù)發(fā)模型的研究可知，與表現(xiàn)出全身復(fù)發(fā)的PBS組相比，接種A/M/C-MNC疫苗可**原發(fā)部位復(fù)發(fā)性**的生長，并且在其他部位則未觀察到轉(zhuǎn)移信號(hào)。在A/M/C-MNC(m)組中可以觀察到更好的結(jié)果。研究磁小體疫苗的記憶效應(yīng)，利用建立的合適的動(dòng)物模型證明了用A/M/C-MNC(m)+ aP方案**后具有**的免疫記憶作用。

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zzj 2021.2.24