環(huán)形核酸適體（cb-apt）是一類化學(xué)工程的適配體，具有優(yōu)良的穩(wěn)定性和分子識(shí)別能力，但是它在方面的應(yīng)用依然受到挑戰(zhàn)。

我們?cè)O(shè)計(jì)了一種β環(huán)糊精修飾的環(huán)形核酸適體（cb-apt-βCD），它與分子劑通過主客體化學(xué)的超分子相互作用，實(shí)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)貨物的靶向遞送。**將分子容器β環(huán)糊精，共軛到單鏈sgc8核酸適配體上（靶向細(xì)胞表面的蛋白質(zhì)酪氨酸激酶（PTK7））；接著用一個(gè)互補(bǔ)的單鏈進(jìn)行環(huán)化形成cb-apt-βCD。與單體核酸適體相比，這種超分子系統(tǒng)具有高的血清穩(wěn)定性且能增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)貨物的傳遞效率。這種環(huán)形核酸適體運(yùn)載綠色熒光蛋白（GFP）的效率高達(dá)80%，運(yùn)載的毒性蛋白-皂草素能細(xì)胞的生長(zhǎng)。

圖1  cb-apt-βCD的合成路徑、與金剛烷修飾的蛋白之間的超分子相互作用及其介導(dǎo)的增強(qiáng)蛋白遞送的示意圖。**將分子容器β環(huán)糊精，共軛到單鏈sgc8核酸適配體上；接著用一個(gè)互補(bǔ)的單鏈進(jìn)行環(huán)化形成cb-apt-βCD。其不僅能保持環(huán)形核酸適體高度的血清穩(wěn)定性，還能封裝疏水性的小分子或者金剛烷修飾的蛋白，形成一個(gè)超分子系統(tǒng)，增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)的遞送。

圖2  通過DBCO共軛和無銅點(diǎn)擊反應(yīng)合成β環(huán)糊精修飾的單鏈核酸適體。通過液相色譜法分離純化得到β環(huán)糊精修飾的單鏈核酸適體；利用互補(bǔ)鏈雜化連接形成cb-apt-βCD ，可由變性聚丙烯酰胺凝膠電泳證實(shí)。

圖3  將GFP作為一個(gè)模式蛋白，化學(xué)修飾上金剛烷。通過TMR-apt-βCD 和GFP-AdA的熒光共振能量轉(zhuǎn)移效率證明他們之間形成包含絡(luò)合物。其次這種復(fù)合物在血清中也能高度穩(wěn)定，為細(xì)胞內(nèi)蛋白的運(yùn)輸提供了保障。

圖4  研究cb-apt-βCD介導(dǎo)GFP運(yùn)載進(jìn)細(xì)胞的情況。通過激光共聚焦細(xì)胞成像實(shí)驗(yàn)和流式分析實(shí)驗(yàn)證明該復(fù)合物能明顯增強(qiáng)GFP的細(xì)胞遞送，且運(yùn)載效率高達(dá)80%。

圖5  研究該復(fù)合物運(yùn)載功能蛋白-皂草素進(jìn)細(xì)胞的情況。通過MTT檢測(cè)方法證實(shí)cb-apt-βCD具有增強(qiáng)功能蛋白運(yùn)載效率的性質(zhì)。

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