文獻(xiàn)：Precise and non-invasive circulating tumor cell isolation based on optical force using homologous erythrocyte binding?

文獻(xiàn)鏈接：https://pubs.rsc.org/en/content/articlehtml/2021/xx/c9lc00361d

作者：Xuejia Hu? ac, Daoming Zhu? a, Ming Chen? b, Keke Chen a, Hailiang Liu a, Wei Liu *a and Yi Yang

為了驗(yàn)證DSPE結(jié)合性能，使用DSPE-PEG-Cy5標(biāo)記RBC。將RBC與DSPE-PEG-Cy5混合并結(jié)合后，洗滌混合物并重新懸浮在PBS緩沖液中，以去除游離的DSPE和熒光染料。在激光照射下，使用共聚焦激光掃描顯微鏡（CLSM）在顯微鏡下捕獲的標(biāo)記紅細(xì)胞的熒光圖像；幾乎所有的細(xì)胞都發(fā)出紅色熒光，表明質(zhì)膜和DSPE分子之間存在強(qiáng)而高效的結(jié)合。

然后，為了揭示FA與腫瘤細(xì)胞之間的聯(lián)系，將MCF-7細(xì)胞分別與標(biāo)記有DSPE-PEG-FA和DSPE-PEG-Cy5的紅細(xì)胞混合。與修飾的紅細(xì)胞孵育一小時(shí)后，用FA紅細(xì)胞培養(yǎng)的MCF-7細(xì)胞被許多工程紅細(xì)胞覆蓋，用RBCs-Cy5培養(yǎng)的MCF-7-細(xì)胞與紅細(xì)胞分離，表明紅細(xì)胞、DSPE-PEG-FA和腫瘤細(xì)胞之間存在穩(wěn)定的連接。分別用Hoechst（腫瘤細(xì)胞核）和Cy5（紅細(xì)胞膜）染料標(biāo)記的MCF-7和紅細(xì)胞的CLSM圖像。

通過這種無害的化學(xué)結(jié)合，許多紅細(xì)胞緊緊地結(jié)合在CTC的膜上。在顯微鏡下計(jì)數(shù)每個(gè)CTC上附著的紅細(xì)胞的平均數(shù)量，統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明，幾乎所有的腫瘤細(xì)胞都被五個(gè)以上的紅細(xì)胞覆蓋，98%的腫瘤細(xì)胞被十到二十個(gè)紅細(xì)胞覆蓋。

此外，使用十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）檢測紅細(xì)胞膜蛋白。48 SDS可以破壞細(xì)胞蛋白與其他分子之間的連接，不同的細(xì)胞蛋白會(huì)在聚丙烯酰胺凝膠中行進(jìn)不同的距離；因此，使用這種方法分離并揭示了紅細(xì)胞的蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)分析結(jié)果如圖2e所示，修飾和未修飾的紅細(xì)胞在膜蛋白中保持不變，表明修飾過程將保持細(xì)胞膜的完整性，對紅細(xì)胞友好。

為了揭示紅細(xì)胞膜和DSPE的結(jié)合性能，捕獲了用DSPE-PEG-Cy5修飾的紅細(xì)胞的CLSM照片；與DSPE結(jié)合的紅細(xì)胞會(huì)發(fā)出紅色熒光。比例尺：20μm。（b）用DSPE-PEG-FA修飾的紅細(xì)胞培養(yǎng)的MCF-7的亮場圖像。比例尺為30μm。（c）用DSPE-PEG-Cy5修飾的紅細(xì)胞培養(yǎng)的MCF-7的亮場圖像。比例尺為30μm。（d）與FA紅細(xì)胞孵育后單個(gè)HCT116細(xì)胞的兩個(gè)熒光圖像；細(xì)胞核用Hoechst（藍(lán)色）標(biāo)記，RBC膜用Cy5（紅色）標(biāo)記。比例尺為20μm。（e）修飾前后紅細(xì)胞的SDS-PAGE蛋白分析。

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