英文名稱: AF647-Glucose
中文名稱: AF647標(biāo)記的葡萄糖
AF647-Glucose是一種通過(guò)Alexa Fluor 647熒光染料標(biāo)記的葡萄糖衍生物。葡萄糖是生物體主要的能量來(lái)源,其跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)及代謝過(guò)程受葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(GLUTs)和己糖激酶等酶的嚴(yán)格調(diào)控。通過(guò)化學(xué)修飾將Alexa Fluor 647染料共價(jià)連接至葡萄糖分子,可實(shí)現(xiàn)對(duì)其在細(xì)胞或組織中動(dòng)態(tài)變化的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。
Alexa Fluor 647是一種近紅外熒光染料,激發(fā)波長(zhǎng)約為650納米,發(fā)射波長(zhǎng)約為668納米,具有穿透力強(qiáng)、背景熒光低的優(yōu)勢(shì),適合深層組織成像或活體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。標(biāo)記后的葡萄糖保留了被細(xì)胞攝取和磷酸化的能力,可通過(guò)熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測(cè)其在細(xì)胞內(nèi)的積累。例如,在糖尿病研究中,AF647-Glucose可用于比較不同細(xì)胞系對(duì)葡萄糖的攝取速率,或評(píng)估胰島素對(duì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白活性的調(diào)節(jié)作用。
該標(biāo)記物的應(yīng)用還包括代謝通路示蹤、藥物篩選及腫瘤微環(huán)境研究。腫瘤細(xì)胞因代謝重編程通常表現(xiàn)出更高的葡萄糖攝取率,AF647-Glucose可輔助區(qū)分正常組織與腫瘤區(qū)域。此外,通過(guò)與葡萄糖類(lèi)似物競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,可定量測(cè)定GLUTs的表達(dá)水平或篩選潛在抑制劑。實(shí)驗(yàn)中需注意標(biāo)記過(guò)程可能引入的空間位阻,避免影響葡萄糖與轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的結(jié)合親和力。
制備AF647-Glucose通常涉及葡萄糖羥基的活化(如通過(guò)異硫氰酸酯或琥珀酰亞胺酯反應(yīng)),隨后與染料的氨基基團(tuán)偶聯(lián)。純化后的產(chǎn)物需通過(guò)核磁共振(NMR)和熒光光譜確認(rèn)結(jié)構(gòu)及標(biāo)記效率。由于葡萄糖在體內(nèi)代謝迅速,標(biāo)記物的穩(wěn)定性及細(xì)胞滲透性需通過(guò)優(yōu)化反應(yīng)條件(如pH、溫度)得以提升。
AF647-Glucose為代謝生物學(xué)研究提供了高靈敏度工具,幫助科學(xué)家解析葡萄糖在細(xì)胞內(nèi)的命運(yùn),推動(dòng)對(duì)能量代謝疾病及腫瘤代謝異質(zhì)性的機(jī)制探索。
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