文獻：寡聚荷正電氨基酸修飾的基因遞送納米脂質(zhì)載體的構(gòu)建和初步評價

作者：張雪敬

文獻鏈接: https://d.wanfangdata.com.cn/thesis/Y2582217

摘要：

本文合成了能高效提高轉(zhuǎn)染效率的DC-Chol，以及賦予脂質(zhì)體pH敏感性能的CHEMS，對其化學(xué)結(jié)構(gòu)進行表征。將DSPE-PEG(2000)與CPP共軛連接，得到導(dǎo)向性脂材DSPE-PEG-CPP，以提高脂質(zhì)體對細胞的攝取能力。構(gòu)建了一種能使siRNA沖破內(nèi)涵體逃逸障礙，避免被溶酶體滅活的CPP修飾載壓縮物脂質(zhì)體CL2，和一種CPP修飾的非載壓縮脂質(zhì)體CL1，并對其進行表征和初步的評價�！�

方法:　　

1.膽固醇氯甲酸酯和過量N，N-二甲基乙二胺分別溶于無醇氯仿中，0-4℃冰水浴條件下反應(yīng)。TLC監(jiān)測反應(yīng)進程，待膽固醇氯甲酸酯反應(yīng)完全后終止反應(yīng)（約2h），旋蒸揮干溶劑，干燥后用熱絕對乙醇重結(jié)晶兩次純化并真空干燥�！　�

2.膽固醇與過量的丁二酸酐溶于20mL甲苯， DMAP作為催化劑，加熱回流反應(yīng)3h。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)揮干溶劑，干燥后重結(jié)晶兩次，得到灰色產(chǎn)品�！　�

3.Mal-PEG-DSPE用氯仿-甲醇(3∶1)溶解，旋轉(zhuǎn)成膜，HBS(pH6.5)溶液3.0mL水化，和CPP肽溶液(5mg溶于HBS(pH6.5)2.0mL)混合，攪拌反應(yīng)48h，加入半胱氨酸適量繼續(xù)攪拌4h，透析2d，冷凍干燥。　　

4.空白脂質(zhì)體單因素考察，通過固定膜材總量;DOPE∶CHEMS比例的篩選;添加Chol對制劑的影響;水化液選擇;超聲時間的選擇，最終確定空白脂質(zhì)體制備方法�！　�

5.構(gòu)建非壓縮載藥脂質(zhì)體(NL1/CL1)和載壓縮物脂質(zhì)體(NL2和CL2)，并進粒徑、電位和電鏡表征。

結(jié)論:　　

實驗結(jié)果表明，DC-Chol以及CHEMS合成路線可靠，產(chǎn)率分別為60.3％、78％，產(chǎn)品純度較高，重現(xiàn)性高�！　�

由Ellman試劑判斷反應(yīng)進程，質(zhì)譜測定得出的分子離子峰推測產(chǎn)物結(jié)構(gòu)，成功地將CPP共軛連接到DSPE-PEG(2000)中的PEG遠端，得到增強細胞穿透能力的導(dǎo)向性脂材DSPE-PEG(2000)-CPP�！�

成功地制備了四組遞送siRNA的遞送納米脂質(zhì)載體CPP修飾非壓縮載藥脂質(zhì)體(NL1)、普通修飾非壓縮載藥脂質(zhì)體(NL2)、普通修飾在壓縮物脂質(zhì)體(CL1)、CPP修飾載壓縮物脂質(zhì)體(CL2)�！　�

四組制劑均提高了細胞攝取效率。普通脂質(zhì)體與CPP修飾的脂質(zhì)體的細胞攝取相對較高，但差異并不顯著。導(dǎo)致這個結(jié)果的可能的原因是，如DSPE-PEG-CPP合成產(chǎn)物中有較多剩余脂材原料，反應(yīng)條件有待進一步優(yōu)化，產(chǎn)物純度有待提高。

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