核苷酸糖轉(zhuǎn)運(yùn)體(NSTs)是ER和高爾基族的溶質(zhì)載體35 (SLC35)家族成員，通過(guò)將腔內(nèi)單磷酸核苷酸交換為胞質(zhì)核苷酸糖，為糖基化提供底物。NSTs缺陷已被證實(shí)與先天性糖基化(CDG)疾病有關(guān)，然而，許多類型CDG的分子基礎(chǔ)仍不明確。為了更好地理解NSTs的生物學(xué)特性，我們確定了udp -半乳糖轉(zhuǎn)運(yùn)體(SLC35A2)、udp - n -乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體(SLC35A3)和一個(gè)孤兒核苷酸糖轉(zhuǎn)運(yùn)體SLC35A4的潛在相互作用伙伴。

為此，我們將每個(gè)SLC35A2-A4蛋白作為誘餌進(jìn)行了四個(gè)獨(dú)立的下拉實(shí)驗(yàn)，并用質(zhì)譜技術(shù)鑒定了免疫沉淀物質(zhì)。從獲得的候選名單中，我們選擇了一些使用納米比特系統(tǒng)(一種基于熒光素的分離發(fā)光技術(shù))在體外確認(rèn)相互作用的候選名單。NSTs與兩種atp酶(ATP2A2、ATP2C1)、高爾基pH調(diào)節(jié)因子B (GPR89B)和鈣通道(TMCO1)相互作用，這可能反映了離子穩(wěn)態(tài)對(duì)糖基化的調(diào)節(jié)作用，并與basigin (BSG)相互作用。

我們的發(fā)現(xiàn)為NST相互作用網(wǎng)絡(luò)的發(fā)現(xiàn)提供了一個(gè)起點(diǎn)，以便更好地理解糖基化是如何被調(diào)節(jié)并與其他細(xì)胞過(guò)程相聯(lián)系的。意義:盡管核苷酸糖轉(zhuǎn)運(yùn)體是蛋白質(zhì)糖基化機(jī)制的關(guān)鍵組成部分，并且其缺乏活性是嚴(yán)重的代謝性疾病的基礎(chǔ)，但這些必需蛋白質(zhì)的生物學(xué)、功能和調(diào)節(jié)仍是謎。

在本研究中，我們通過(guò)識(shí)別一組新的潛在的相互作用伙伴，用于udp -半乳糖轉(zhuǎn)運(yùn)體(SLC35A2)、udp - n -乙酰氨基葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體(SLC35A3)和一個(gè)孤兒轉(zhuǎn)運(yùn)體SLC35A4，但其作用尚未確定。其中幾個(gè)新的相互作用通過(guò)NanoBiT系統(tǒng)在體外得到證實(shí)，這是一種分裂熒光素酶互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)。這項(xiàng)工作的意義還在于，它通過(guò)對(duì)4種不同的共免疫沉淀策略的詳細(xì)比較，以及定制的樣品制備和數(shù)據(jù)處理工作流程，解決了發(fā)現(xiàn)膜蛋白相互作用伙伴的總體挑戰(zhàn)。

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