提供一種新型使用FITC來標(biāo)記蛋白質(zhì)的方法

　　1)制備溶于0.1m碳酸鈉緩沖液(pH9.0)的待標(biāo)蛋白溶液，濃度≥2mg/ml.

　　2)將FITC溶解在無水DMSO中，制成1mg/ml溶液。

　　3)將50μFITC溶液添加到1ml蛋白溶液中，可根據(jù)每次5μ量輕輕攪拌蛋白溶液;

　　4)加入所需FITC后，反應(yīng)液在4°C避光孵化8h;

　　5)加入NH4CI，使其終濃度達(dá)到50mm，4°C終止反應(yīng)2h;

　　6)加入二甲苯綠至0.1%，甘油至5%;

　　7)通過對(duì)尺寸和孔徑合適的凝膠過濾層進(jìn)行分析和分離，排除未結(jié)合的FITC，分離范圍為2000-50000(球蛋白如抗體)。凝膠柱平衡后，從柱頂注入上述反應(yīng)混合波，

    　　打開凝膠柱，流入柱床后加入PBS緩沖液。

    　　此時(shí)，可形成兩條帶：

            a.快速移動(dòng)帶，即FITC-蛋白質(zhì)標(biāo)記物，**被洗掉，通常在室內(nèi)光下可見;

            B.慢速移動(dòng)帶，即FITC和二=甲苯綠，沒有蛋白質(zhì)結(jié)合。

    　　僅在PBS緩沖液清洗后就被洗掉了。

　　8)將上述偶聯(lián)物儲(chǔ)存在4°C中，加入0.1%(w/v)疊氮化鈉作為防腐劑。如果蛋白質(zhì)濃度低(1mg/ml)，可以加入1%BSA作為蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑。

　　9)標(biāo)記物中熒光素與蛋白質(zhì)的比值(F/P)可通過測(cè)量495nm和280nm處的吸光值來識(shí)別，F(xiàn)/P應(yīng)位于0.3-1.0。如果比例小，信號(hào)太低，如果比例高，背景太高。

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