熒光標(biāo)記多肽
熒光染料標(biāo)記的多肽用于生物體內(nèi)生物醫(yī)學(xué)成像、蛋白結(jié)合和定位等的研究。熒光素可以直接和多肽的N端直接相連(異硫氰酸熒光素的連接, 通常在多肽的N端和異硫氰酸熒光素直接插一個(gè)氨基乙酸或者β-丙氨酸。),或者在C端和賴氨酸(或半胱氨酸)的側(cè)鏈連接、或者在其它可以連接的位子連接。
異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記
異硫氰酸熒光素(FITC)具有永久性標(biāo)記生物分子的獨(dú)特檢測性能,可用于檢測或跟蹤共軛物與其他生物分子的相互作用。FITC是熒光素的異硫氰酸酯衍生物,主要通過對其5-碳位下環(huán)的改性合成。FITC的異硫氰酸酯能與蛋白質(zhì)或抗體的伯胺基發(fā)生反應(yīng),這種性質(zhì)可用于標(biāo)記。FITC的熒光特性包括在495nm處的吸光度和520nm的發(fā)射波長。
FITC標(biāo)記抗體的原理
FITC異硫氰酸熒光素是目前較為常用的標(biāo)記抗體的方法,F(xiàn)ITC一般呈黃色、褐色或褐黃色粉末或結(jié)晶,性質(zhì)穩(wěn)定在低溫中能保存數(shù)年。在堿性條件下,F(xiàn)ITC的碳酰胺鍵可與抗體蛋白上的賴氨酸氨基共價(jià)結(jié)合,形成FITC-蛋白質(zhì)結(jié)合物,即熒光抗體或熒光結(jié)合物。一個(gè)抗體分子上多能標(biāo)記15~20個(gè)FITC分子,被標(biāo)記的抗體仍能保持與相應(yīng)抗原結(jié)合的能力,在熒光燈源紫外線或藍(lán)紫光激發(fā)下產(chǎn)生黃綠色熒光,通過熒光顯微鏡進(jìn)行觀察或利用流式細(xì)胞儀分析,從而對抗原進(jìn)行定性、定位或定量。
FITC抗體標(biāo)記注意事項(xiàng)
1.影響標(biāo)記效率的因素有溫度、時(shí)間、pH、熒光素和蛋白的量等,需注意控制;
2.熒光素及其標(biāo)記抗體的操作過程注意避光,攪拌速度應(yīng)適當(dāng)避免氣泡的產(chǎn)生;
3.層析柱裝柱注意正確操作,使柱體均勻、柱面平整,無氣泡、裂隙;
4.上樣和洗脫應(yīng)做到“前切”和“后切”。前切指柱頂緩沖液與凝膠平面相切時(shí)再加樣品,后切指樣品走至與凝膠平面相切時(shí)再加入洗脫緩沖液。
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產(chǎn)地 :西安
純度:99%
用途:僅用于科研
溫馨提示:僅用于科研,不能用于人體實(shí)驗(yàn)!
QY小編 ysl 2022.5.30