熒光染料是指吸收紫外線或可見光后發(fā)射波長較長的可見光的物質,大多是含有苯環(huán)或雜環(huán)并帶有共軛雙鍵的化合物。其用途廣泛,醫(yī)學上可用于進行基因檢測、分類與識別,尤其在單分子技術中。熒光染料也起到了重要作用由于其高靈敏度、操作方便等優(yōu)點熒光染料作為標記物已廣泛應用于熒光免疫、熒光探針、細胞染色等多個方面。很多單分子技術,如熒光共振能量轉移、雙光子融合技術等,運用染料分子來標記待測物質,測得其熒光光譜從而闡述DNA轉錄、RNA聚合、動力蛋白和蛋白質折疊機理。
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一、FITC的特性
異硫氰酸熒光素(FITC)呈黃色、橙黃色或褐黃色粉末或結晶,性質穩(wěn)定,在室溫下能保存兩年以上,在低溫中可保存多年。易溶于水和酒精。吸收光譜為490~495nm,發(fā)射光譜為520~530nm,呈現黃綠色熒光,分子量為398.4.
在堿性條件下(pH8.5以上),FITC的異硫酸基在水溶液中與免疫球蛋白的自由氨基經碳酰胺化而形成硫碳氨基鍵,成為標記熒光免疫球蛋白,即熒光抗體。一個Ig分子上能標記15~20個FITC分子。
FITC有兩種異構體:
異構體 I, 即 5-異硫氰酸熒光素 或 5-FITC
異構體 II, 即 6-異硫氰酸熒光素 或 6-FITC
異硫氰酸熒光素通常是由其中一種異構體或者有時是兩種異構體的混合物構成(混合物的CAS編號為27072-45-3)。早在1942年,FITC首次用于抗體標記。[1]
由于異硫氰酸酯基團的存在以及其高熒光性,FITC常用于蛋白質或多糖等多種底物的標記試劑。異硫氰酸酯在溫和條件下與親核試劑,例如胺,極易反應。
圖1. FITC異構體1的結構式。FITC異構體1 (5-異硫氰酸熒光素) 在5位上含異硫氰酸酯基團。
光譜性質:
FITC在λ= 495 nm處有激發(fā)波長,在λ = 519 nm處有發(fā)射波長 (參見圖2) [2]。.該化合物是黃色的,而發(fā)射光則是綠色的。FITC兩種異構體的激發(fā)和發(fā)射波長的差別是很小的。FITC標記的功能性生物聚合物,如FITC標記葡聚糖,具有與母體分子相似的激發(fā)和發(fā)射特性,使FITC成為熒光標記的理想載體。
圖 2. FITC異構體I的激發(fā)(橙色) 和發(fā)射(藍色)光譜。在495 nm處有大激發(fā)波長,在 519 nm處有大發(fā)射波長。
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以上來自小編zhn2020.10.29
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