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一、概述

CNBr 瓊脂糖磁珠是活化好的磁珠，它采用平均粒徑為20~45 μm的6%高度交聯(lián)瓊脂糖凝膠，表面用大分子糖鏈接枝，使它有更高的比表面積和更好的生物兼容性，用它合成的親和填料，它避免蛋白之間位阻以及蛋白和填料的位阻干擾，使其同等配基下有更高載量，同時有更好的分辨率。由于比表面積大，平衡和洗脫的時間也更短。它經(jīng)過接枝即使是純化病毒，抗體等大分子的物質(zhì)，載量基本保持不變�？梢栽谒�相或者有機(jī)相中偶聯(lián)。提供的該CNBr 瓊脂糖磁珠已活化。

二、產(chǎn)品特性

注：磁珠蛋白結(jié)合量與目標(biāo)蛋白特性相關(guān)，此處僅作參考值。

三、使用方法

1. 產(chǎn)品特點(diǎn)

   偶聯(lián)條件溫和(pH8~10、4~45°C、時間1~16小時)，偶聯(lián)效率高(每1 mL磁珠可偶聯(lián)18~30 mg BSA)。

   填料不需要處理，直接計(jì)算合適的量用于偶聯(lián)。

   保存時間長，4~8 ℃可以保存一年半，-20℃可以保存2年，同時應(yīng)該避免受潮。

   可偶聯(lián)包含多糖，蛋白，核酸，抗體以及其他含有NH₂配基的物質(zhì)，使用范圍廣。

2. 蛋白偶聯(lián)操作步驟

以用該CNBr活化瓊脂糖磁珠偶聯(lián)牛血清白蛋白(BSA)為例：

1)        取BSA 100 mg溶解于10 ml的0.25 M碳酸鈉緩沖液中，pH9.0。

2)        將磁珠用0.25 M碳酸鈉緩沖液（pH9.0）溶脹后，吸取適量的磁珠，用上述緩沖液洗滌2次。

3)        將5 mL磁珠加入溶解后的BSA 溶液中混合，在搖床上振蕩，25℃偶聯(lián)6小時。

4)        然后加0.1M Tris-HCl，pH8.3，再反應(yīng)6個小時封閉剩余的基團(tuán)。

5)        偶聯(lián)了BSA 的磁珠，用1 M NaCl 溶液洗3-5次，收集偶聯(lián)后剩余的液體以及洗滌的溶液測定BSA 的總量，再用純水洗滌磁珠3次，最后將磁珠保存在相應(yīng)蛋白保存緩沖液中。

6)        BSA 的偶聯(lián)量為25 mg/ml. 計(jì)算方法：BSA 的吸附載量=（G0—G1）/V。

G0：BSA 總使用量，單位：mg；

G1：偶聯(lián)反應(yīng)后未偶聯(lián)的 BSA 的量，單位：mg；

V：填料的體積，單位：mL；

備注：該偶聯(lián)方法可用于偶聯(lián)單抗及其它蛋白，均能獲得很好的偶聯(lián)效果。