熒光修飾多肽定制技術(shù)
一、概述
熒光標(biāo)記多肽常用于細(xì)胞成像、靶向驗證、酶解監(jiān)測、細(xì)胞攝取實驗等。通過N端/C端或側(cè)鏈引入熒光基團(tuán),能在保持多肽功能的基礎(chǔ)上實現(xiàn)可視化追蹤。
二、定制技術(shù)流程
1. 多肽設(shè)計與合成
在N端引入Lys(–NH?)或Cys(–SH)作為標(biāo)記位點
合成時可保護(hù)其它反應(yīng)基團(tuán)(如Ser、Tyr)
2. 熒光染料選擇與標(biāo)記
FITC標(biāo)記N端Lys(常用于綠色熒光)
Rhodamine B標(biāo)記N端/側(cè)鏈
Cy5、Cy3、FAM等紅外或紅熒光染料用于深部成像
多肽溶于PBS或DMF中,染料預(yù)活化后緩慢滴加
3. 反應(yīng)與純化
條件:pH 7.4–8.5,4~25℃,避光反應(yīng)6–12 h
純化:HPLC(C18柱)、透析或冷凍干燥
4. 驗證方法
質(zhì)譜(MALDI)確定標(biāo)記質(zhì)量
熒光光譜分析量化效率
SDS-PAGE或GPC檢測標(biāo)記多肽遷移行為
三、應(yīng)用
多肽遞送示蹤
多肽-細(xì)胞相互作用研究
FRET探針構(gòu)建
靶向成像與治療監(jiān)控
四、推薦試劑
名稱 | 用途說明 |
合成多肽(含Cys或Lys) | 熒光標(biāo)記位點 |
FITC、Cy5-NHS、Rhodamine B | 熒光染料 |
HEPES、PBS緩沖液 | 反應(yīng)體系 |
HPLC系統(tǒng)、質(zhì)譜儀 | 純化與分析工具 |
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